Efficient proximity labeling in living cells and organisms with TurboID.
Efficient proximity labeling in living cells and organisms with TurboID.
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使用 TurboID 在活细胞和生物体中进行高效邻近标记。
DOI：
10.1038/nbt.4201
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发表时间：
2018-10
影响因子：
46.9
通讯作者：
Ting AY
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Branon TC;Bosch JA;Sanchez AD;Udeshi ND;Svinkina T;Carr SA;Feldman JL;Perrimon N;Ting AY
蛋白质相互作用网络和蛋白质区划是细胞中所有信号和调控过程的基础。酶催化邻近标记(PL)是研究活细胞中蛋白质的空间和相互作用特性的一种新方法。然而，目前的PL方法需要18小时以上的标记时间或使用细胞渗透性有限或毒性高的化学物质。我们利用酵母展示定向进化技术设计了生物素连接酶的两个混杂突变体TurboID和mini Turbo，它们比BioID或BioID2更高效地催化PL，并使生物素在无毒且易于输送的细胞中持续10分钟。此外，TurboID将基于生物素的PL扩展到苍蝇和蠕虫。
Protein interaction networks and protein compartmentalization underlie all signaling and regulatory processes in cells. Enzyme-catalyzed proximity labeling (PL) has emerged as a new approach to study the spatial and interaction characteristics of proteins in living cells. However, current PL methods require over 18 hour labeling times or utilize chemicals with limited cell permeability or high toxicity. We used yeast display-based directed evolution to engineer two promiscuous mutants of biotin ligase, TurboID and miniTurbo, which catalyze PL with much greater efficiency than BioID or BioID2, and enable 10-minute PL in cells with non-toxic and easily deliverable biotin. Furthermore, TurboID extends biotin-based PL to flies and worms.
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