Epitope Mapping of an Anti-Human EGFR Monoclonal Antibody (EMab-51) using the REMAP Method
Epitope Mapping of an Anti-Human EGFR Monoclonal Antibody (EMab-51) using the REMAP Method
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使用 REMAP 方法对抗人 EGFR 单克隆抗体 (EMab-51) 进行表位作图
DOI：
10.1089/mab.2021.0010
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发表时间：
2021
期刊：
影响因子：
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通讯作者：
Kato Y.
中科院分区：
文献类型：
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作者：
Nanamiya R;Sano M;Asano T;Yanaka M;Nakamura T;Saito M;Tanaka T;Hosono H;Tateyama N;Kaneko MK;Kato Y.
用于鉴定单克隆抗体（mAb）结合的表位的经典方法使用靶蛋白的缺失突变体和点突变体。然而，确定单克隆抗体反应性膜蛋白的表位往往是具有挑战性的。我们最近开发了里德尔插入表位作图（REMAP）方法来鉴定mAb结合表位。在此，我们首先检查了抗表皮生长因子受体（EGFR）mAb（EMab-51）对几种EGFR缺失突变体如EGFR/dN 152、EGFR/dN 313、EGFR/dN 370、EGFR/dN 375、EGFR/dN 380和EGFR/dN 482的反应性。我们在EGFR的残基375和380之间发现了EMab-51结合表位的N-末端。我们接着产生EGFR/dN 313突变体，其在375-AFRGDSFTHTPPLDP-389的每个可能位置插入里德尔肽标签。EMab-51与在377-RGDSFTTPP-386的每个位置插入里德尔标签的突变体失去反应性，而LpMab-7（抗里德尔mAb）检测到所有突变体。因此，使用REMAP方法，我们将EGFR的EMab-51结合表位鉴定为377-RGDSFTTPP-386。
The classic method for identifying the epitope that monoclonal antibodies (mAbs) bind uses deletion mutants and point mutants of the target protein. However, determining the epitope of mAbs-reactive membrane proteins is often challenging. We recently developed the RIEDL insertion for epitope mapping (REMAP) method to identify mAb-binding epitopes. Herein, we first checked the reactivity of an anti-epidermal growth factor receptor (EGFR) mAb (EMab-51) to several EGFR deletion mutants such as EGFR/dN152, EGFR/dN313, EGFR/dN370, EGFR/dN375, EGFR/dN380, and EGFR/dN482. We found the N-terminus of the EMab-51-binding epitope between residues 375 and 380 of EGFR. We next produced EGFR/dN313 mutants with the RIEDL peptide tag inserted at each possible position of375-AFRGDSFTHTPPLDP-389. EMab-51 lost its reactivity with the mutants having a RIEDL tag inserted at each position of377-RGDSFTHTPP-386, whereas LpMab-7 (an anti-RIEDL mAb) detected every mutant. Thus, using the REMAP method, we identified the EMab-51-binding epitope of EGFR as377-RGDSFTHTPP-386.