Electroporation of mammalian cells with a firefly luciferase expression plasmid: kinetics of transient expression differ markedly among cell types.
Electroporation of mammalian cells with a firefly luciferase expression plasmid: kinetics of transient expression differ markedly among cell types.
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用萤火虫荧光素酶表达质粒电穿孔哺乳动物细胞：瞬时表达的动力学在细胞类型之间存在显着差异。
DOI：
10.1089/dna.1.1988.7.557
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发表时间：
1988
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
Maxwell,F
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Maxwell,IH;Maxwell,F
电穿孔与荧光素酶报告系统的组合提供了一种快速和灵敏的手段，确定从质粒构建体在各种哺乳动物细胞中的瞬时表达。描述了允许使用商业电穿孔装置对几种细胞类型进行有效电穿孔的条件。在电穿孔后的不同时间制备的提取物上的测量显示，荧光素酶活性快速上升长达12小时，随后，在某些细胞类型中，由一个快速下降。对于这样的细胞，如常规的那样，在48-72小时后进行的测定将大大低估荧光素酶报告基因的表达。因此，为了观察最佳活性，必须确定每种细胞类型的表达动力学。
Electroporation in combination with the luciferase reporter system provides a rapid and sensitive means of determining transient expression from plasmid constructs in various mammalian cells. Conditions are described allowing efficient electroporation of several cell types with a commercial electroporation device. Measurements on extracts prepared at various times after electroporation showed a rapid rise in luciferase activity for up to 12 hr, which was followed, in certain cell types, by a rapid decline. With such cells, determinations made after 48–72 hr, as is conventional, would greatly underestimate expression of the luciferase reporter gene. Therefore, to observe optimum activity, the kinetics of expression must be determined for each cell type.
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