Rheostatic Control of Cas9-Mediated DNA Double Strand Break (DSB) Generation and Genome Editing.
Rheostatic Control of Cas9-Mediated DNA Double Strand Break (DSB) Generation and Genome Editing.
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DOI：
10.1021/acschembio.7b00652
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发表时间：
2018-02-16
影响因子：
4
通讯作者：
Maly DJ
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Rose JC;Stephany JJ;Wei CT;Fowler DM;Maly DJ
我们最近报道了两种用于精确控制和定量Cas9活性的新工具：可以被小分子快速激活的化学诱导型Cas9变体（ciCas 9）和用于时间分辨测量DNA双链断裂的ddPCR测定（DSB-ddPCR）。在这里，我们进一步证明了ciCas 9作为Cas9功能的可调变阻器的潜力。我们发现，一种新的高效和选择性的小分子激活剂与更严格调控的ciCas 9变体配对，扩大了可获得的Cas9活性水平的范围。我们随后证明，ciCas 9活性水平可以用小分子激活剂进行剂量依赖性调节，从而促进变阻时程实验。这些研究首次深入了解了Cas9介导的DSB水平如何与整体编辑效率相关。因此，我们证明了ciCas 9和我们的DSB-ddPCR测定允许在宽范围的Cas9活性水平下对Cas9 DSB生成和基因组编辑动力学进行时间分辨研究。
We recently reported two novel tools for precisely controlling and quantifying Cas9 activity: a chemically inducible Cas9 variant (ciCas9) that can be rapidly activated by small molecules and a ddPCR assay for time-resolved measurement of DNA double strand breaks (DSB-ddPCR). Here, we further demonstrate the potential of ciCas9 to function as a tunable rheostat for Cas9 function. We show that a new highly potent and selective small molecule activator paired with a more tightly regulated ciCas9 variant expands the range of accessible Cas9 activity levels. We subsequently demonstrate that ciCas9 activity levels can be dose-dependently tuned with a small molecule activator, facilitating rheostatic time-course experiments. These studies provide the first insight into how Cas9-mediated DSB levels correlate with overall editing efficiency. Thus, we demonstrate that ciCas9 and our DSB-ddPCR assay permit the time-resolved study of Cas9 DSB generation and genome editing kinetics at a wide range of Cas9 activity levels.
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CRIS/CAS9活性的生物物理模型，用于基因组编辑和基因调节的合理设计。
影响因子：
4.3
作者：
Farasat I;Salis HM
通讯作者：
Salis HM
影响因子：
46.9
作者：
通讯作者：
--
DOI：
10.1126/science.aad5227
发表时间：
2016-01-01
期刊：
Science (New York, N.Y.)
影响因子：
--
作者：
Slaymaker IM;Gao L;Zetsche B;Scott DA;Yan WX;Zhang F
通讯作者：
Zhang F
通过 CRISPR/Cas9 介导的同源独立靶向整合进行体内基因组编辑
影响因子：
64.8
作者：
Suzuki K;Tsunekawa Y;Hernandez-Benitez R;Wu J;Zhu J;Kim EJ;Hatanaka F;Yamamoto M;Araoka T;Li Z;Kurita M;Hishida T;Li M;Aizawa E;Guo S;Chen S;Goebl A;Soligalla RD;Qu J;Jiang T;Fu X;Jafari M;Esteban CR;Berggren WT;Lajara J;Nuñez-Delicado E;Guillen P;Campistol JM;Matsuzaki F;Liu GH;Magistretti P;Zhang K;Callaway EM;Zhang K;Belmonte JC
通讯作者：
Belmonte JC
DOI：
10.1073/pnas.1700557114
发表时间：
2017-05-23
影响因子：
11.1
作者：
Boyle, Evan A.;Andreasson, Johan O. L.;Greenleaf, William J.
通讯作者：
Greenleaf, William J.