Initial stages of V(D)J recombination: the organization of RAG1/2 and RSS DNA in the postcleavage complex.
Initial stages of V(D)J recombination: the organization of RAG1/2 and RSS DNA in the postcleavage complex.
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DOI：
10.1016/j.molcel.2009.06.022
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发表时间：
2009-07-31
期刊：
影响因子：
16
通讯作者：
Yang, Wei
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Grundy, Gabrielle J.;Ramon-Maiques, Santiago;Dimitriadis, Emilios K.;Kotova, Svetlana;Biertuempfel, Christian;Heymann, J. Bernard;Steven, Alasdair C.;Gellert, Martin;Yang, Wei
为了获得V(D)J重组早期的结构信息，我们分离了RAG1和RAG2核心蛋白与含有一对裂解重组信号序列（RSS）的DNA的复合体。化学计量学和分子质量分析证实该信号端复合物（SEC）含有RAG1和RAG2两个原体。电子显微镜阴性染色显示了一个近似双重对称的锚形粒子。与DNA和蛋白质亚基的平行排列一致，RAG1和RAG2的n端位于复合物的两端，而RSS名称之外的DNA链从复合物的同一面出现，靠近RAG1 n端。这些V(D)J重组酶切割后状态的第一张图像为RAG结构域及其与DNA相互作用的建模提供了一个框架。
To obtain structural information on the early stages of V(D)J recombination, we isolated a complex of the core RAG1 and RAG2 proteins with DNA containing a pair of cleaved recombination signal sequences (RSS). Stoichiometric and molecular mass analysis established that this signal end complex (SEC) contains two protomers each of RAG1 and RAG2. Visualization of the SEC by negative staining electron microscopy revealed an anchor-shaped particle with approximate two-fold symmetry. Consistent with a parallel arrangement of DNA and protein subunits, the N-termini of RAG1 and RAG2 are positioned at opposing ends of the complex, and the DNA chains beyond the RSS nonamer emerge from the same face of the complex, near to the RAG1 N-termini. These first images of the V(D)J recombinase in its post-cleavage state provide a framework for modeling RAG domains and their interactions with DNA.
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