Assessing TFAM Binding to Human Mitochondrial DNA
Assessing TFAM Binding to Human Mitochondrial DNA
复制标题
评估 TFAM 与人类线粒体 DNA 的结合
DOI：
10.1007/978-1-0716-2922-2_11
复制
发表时间：
2023
影响因子：
--
通讯作者：
Kang Dongchon
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Yasukawa Takehiro;Kang Dongchon
线粒体转录因子A（TFAM）是一种线粒体DNA（mtDNA）结合蛋白，在线粒体转录起始和mtDNA维持中起着至关重要的双重作用。由于TFAM直接与mtDNA相互作用，因此评估其DNA结合特性可以提供有用的信息。本章介绍了两种体外测定方法，电泳迁移率变动测定（EMSA）和DNA解旋测定与重组TFAM蛋白，这两个都需要简单的琼脂糖凝胶电泳。这些被用来研究突变，截短和翻译后修饰对这个关键的mtDNA调控蛋白的影响。
Mitochondrial transcription factor A (TFAM) is a mitochondrial DNA (mtDNA)-binding protein that plays a crucial dual role in the initiation of mitochondrial transcription initiation and mtDNA maintenance. Because TFAM directly interacts with mtDNA, assessing its DNA-binding property can provide useful information. This chapter describes two in vitro assay methods, an electrophoretic mobility shift assay (EMSA) and a DNA-unwinding assay with recombinant TFAM proteins, which both require simple agarose gel electrophoresis. These are used to investigate the effects of mutations, truncation, and posttranslational modifications on this key mtDNA regulatory protein.