家蚕let-7 microRNA 靶基因Bmlin-41 的克隆表达与调控
家蚕let-7 microRNA 靶基因Bmlin-41 的克隆表达与调控
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DOI：
10.13345/j.cjb.150435
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发表时间：
2016
期刊：
影响因子：
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通讯作者：
刘仕平
中科院分区：
文献类型：
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作者：
周兰庭;周挺;高君凌;王伟;吴小燕;黄亚玺;夏庆友;刘仕平
异时性基因调控细胞增殖和个体发育阶段的转换。家蚕异时性基因在家蚕变态发育过程中也很可能具有重要的调控作用，但它们的表达模式、生物学功能以及与 microRNA 之间的关系却鲜有报道。本研究首先利用果蝇同源基因 lin-41 搜索家蚕基因组数据库中相似序列，设计引物扩增 Bmlin-41 的编码序列，克隆了家.蚕 Bmlin-41 基因 CDS，其长度为 2 166 bp，编码 721 个氨基酸，含有 B-box 和 NHL 结构域；随后，利用 RT-PCR、qPCR 技术并结合已有的家蚕全基因组芯片数据研究了 Bmlin-41 在家蚕中的时空表达模式，发现 Bmlin-41 在从家蚕胚胎到成虫的发育过程中呈逐渐递增的表达趋势，在五龄 3 d 不同组织中，于卵巢里表达量最高，精巢和中肠次之，而其余组织中低量表达或不表达；最后，利用 3′RACE 克隆了 Bmlin-41 基因的 3′UTR，全长1 434 bp，用在线软件 RNAhybrid预测发现 Bmlin-41的 3′UTR上存在 bmo-let-7靶位点，构建了含 Bmlin-41 3′UTR 的双荧光素酶报告基因载体，在 S2 细胞上共转染 Bmlin-41 3′UTR 和 bmo-let-7 的模拟物 (Mimics) 和拮抗剂 (Antagomir)， bmo-let-7 mimics 显著下调 Bmlin-41， bmo-let-7 antagomir 显著上调 Bmlin-41，证实了 Bmlin-41.是 bmo-let-7 的靶基因。以上研究结果为深入研究 let-7 miRNA 和 Bmlin-41 的功能，揭示 Bmlin-41 和 bmo-let-7 在家蚕变态发育过程中的调控关系提供了新的线索。