Long, processive enzymatic DNA synthesis using 100% dye-labeled terminal phosphate-linked nucleotides.
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DOI：
10.1080/15257770802260741
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发表时间：
2008-09
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
Turner SW
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Korlach J;Bibillo A;Wegener J;Peluso P;Pham TT;Park I;Clark S;Otto GA;Turner SW
我们展示了用携带荧光标记的核苷酸完全取代四种脱氧核糖核苷三磷酸（dNTP）底物的DNA的有效合成。一种不同的，光谱可分离的荧光染料适合于单分子荧光检测，通过与末端磷酸盐的连接，将四种dNTPs中的每一种结合。使用这些修饰的核苷酸，观察到ø29 DNA聚合酶对数千碱基长度的产物进行了DNA合成，标记的核苷酸亲和力和DNA聚合速率接近未修饰的dNTP水平。结果显示，这些核苷酸的兼容性，单分子，实时DNA测序应用。
We demonstrate the efficient synthesis of DNA with complete replacement of the four deoxyribonucleoside triphosphate (dNTP) substrates with nucleotides carrying fluorescent labels. A different, spectrally separable fluorescent dye suitable for single molecule fluorescence detection was conjugated to each of the four dNTPs via linkage to the terminal phosphate. Using these modified nucleotides, DNA synthesis by ø29 DNA polymerase was observed to be processive for products thousands of bases in length, with labeled nucleotide affinities and DNA polymerization rates approaching unmodified dNTP levels. Results presented here show the compatibility of these nucleotides for single-molecule, real-time DNA sequencing applications.
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