Botulinum neurotoxin serotype A specific cell-based potency assay to replace the mouse bioassay.
Botulinum neurotoxin serotype A specific cell-based potency assay to replace the mouse bioassay.
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DOI：
10.1371/journal.pone.0049516
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发表时间：
2012
期刊：
影响因子：
3.7
通讯作者：
Aoki KR
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Fernández-Salas E;Wang J;Molina Y;Nelson JB;Jacky BP;Aoki KR
A 型肉毒杆菌神经毒素 (BoNT/A) 是一种用于治疗多种疾病的有效疗法，通过裂解 SNAP25 来抑制囊泡神经递质胞吐作用。由于 BoNT/A 的效力，开发基于细胞的效力测定 (CBPA) 来评估 BoNT/A 的生物学功能一直具有挑战性。 CBPA可以评估BoNT作用的关键步骤：受体结合、内化易位和催化活性；因此可以取代目前的小鼠生物测定法。原代神经元具有适当的敏感性来开发潜在的替代测定，但这些效力测定难以执行和验证。该报告描述了利用分化的人神经母细胞瘤 SiMa 细胞的 CBPA 和测量 BoNT/A 依赖性细胞内裂解的 SNAP25 增加的夹心 ELISA。测定灵敏度与小鼠生物测定相似，可测量原料药和 BOTOX® 产品（肉毒杆菌毒素 A）中的神经毒素生物活性。质量控制实验室对该 CBPA 版本的验证已获得 FDA、加拿大卫生部和欧盟的批准，可用于 BOTOX®、BOTOX® Cosmetic 和 Vistabel® 的效力测试。此外，我们还开发并优化了 BoNT/A CBPA 筛选方法，可用于发现治疗人类疾病的新型 BoNT/A 抑制剂。
Botulinum neurotoxin serotype A (BoNT/A), a potent therapeutic used to treat various disorders, inhibits vesicular neurotransmitter exocytosis by cleaving SNAP25. Development of cell-based potency assays (CBPAs) to assess the biological function of BoNT/A have been challenging because of its potency. CBPAs can evaluate the key steps of BoNT action: receptor binding, internalization-translocation, and catalytic activity; and therefore could replace the current mouse bioassay. Primary neurons possess appropriate sensitivity to develop potential replacement assays but those potency assays are difficult to perform and validate. This report describes a CBPA utilizing differentiated human neuroblastoma SiMa cells and a sandwich ELISA that measures BoNT/A-dependent intracellular increase of cleaved SNAP25. Assay sensitivity is similar to the mouse bioassay and measures neurotoxin biological activity in bulk drug substance and BOTOX® product (onabotulinumtoxinA). Validation of a version of this CBPA in a Quality Control laboratory has led to FDA, Health Canada, and European Union approval for potency testing of BOTOX®, BOTOX® Cosmetic, and Vistabel®. Moreover, we also developed and optimized a BoNT/A CBPA screening assay that can be used for the discovery of novel BoNT/A inhibitors to treat human disease.
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DOI：
10.1016/j.bbrc.2010.12.132
发表时间：
2011-02-04
影响因子：
3.1
作者：
McNutt, Patrick;Celver, Jeremy;Mesngon, Mariano
通讯作者：
Mesngon, Mariano
影响因子：
1.2
作者：
Kiris, Erkan;Nuss, Jonathan E.;Burnett, James C.;Kota, Krishna P.;Koh, Dawn C.;Wanner, Laura M.;Torres-Melendez, Edna;Gussio, Rick;Tessarollo, Lino;Bavari, Sina
通讯作者：
Bavari, Sina
影响因子：
2.7
作者：
Huber, Alexander;France, Richard M.;Pickett, Andy
通讯作者：
Pickett, Andy
影响因子：
5.3
作者：
Goschel, H;Wohlfarth, K;Bigalke, H
通讯作者：
Bigalke, H
影响因子：
2.8
作者：
Aoki, KR
通讯作者：
Aoki, KR