Chemical Ligation and Isotope Labeling to Locate Dynamic Effects during Catalysis by Dihydrofolate Reductase
Chemical Ligation and Isotope Labeling to Locate Dynamic Effects during Catalysis by Dihydrofolate Reductase
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化学连接和同位素标记定位二氢叶酸还原酶催化过程中的动态效应
DOI：
10.1002/ange.201503968
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发表时间：
2015
影响因子：
--
通讯作者：
Luk L
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Luk L
用化学连接的方法改变 大肠杆菌二氢叶酸还原酶特定区域的运动，以研究局部运动变化对酶催化的影响。制备了两个同位素杂交物；一个含有重同位素(2H，13C，15N)的N-末端，其余的蛋白质具有天然的同位素丰度；另一个只有C-末端的同位素标记。动力学研究表明，N-末端片段的同位素取代只影响催化的物理步骤，而酶的化学作用则受到来自C-末端片段的蛋白质运动的影响。QM/MM的研究支持这样的观点，即对催化的动态影响主要来自C-末端片段。同位素杂化的使用提供了对动态耦合的微观机制的洞察，这是其他研究难以获得的，并有助于定义以酶催化为中心的分子内相互作用的动态网络。
Chemical ligation has been used to alter motions in specific regions of dihydrofolate reductase fromE. coliand to investigate the effects of localized motional changes on enzyme catalysis. Two isotopic hybrids were prepared; one with the mobile N‐terminal segment containing heavy isotopes (2H,13C,15N) and the remainder of the protein with natural isotopic abundance, and the other one with only the C‐terminal segment isotopically labeled. Kinetic investigations indicated that isotopic substitution of the N‐terminal segment affected only a physical step of catalysis, whereas the enzyme chemistry was affected by protein motions from the C‐terminal segment. QM/MM studies support the idea that dynamic effects on catalysis mostly originate from the C‐terminal segment. The use of isotope hybrids provides insights into the microscopic mechanism of dynamic coupling, which is difficult to obtain with other studies, and helps define the dynamic networks of intramolecular interactions central to enzyme catalysis.
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DOI：
10.1021/jp051184c
发表时间：
2005-05
期刊：
The journal of physical chemistry. B
影响因子：
--
作者：
J. Pu;Shuhua Ma;Jiali Gao;D. Truhlar
通讯作者：
J. Pu;Shuhua Ma;Jiali Gao;D. Truhlar
影响因子：
2.9
作者：
Fan Y;Cembran A;Ma S;Gao J
通讯作者：
Gao J
影响因子：
2.9
作者：
Sawaya, MR;Kraut, J
通讯作者：
Kraut, J
影响因子：
15
作者：
Radkiewicz, JL;Brooks, CL
通讯作者：
Brooks, CL
突变对二氢叶酸还原酶酶运动的影响。
影响因子：
15
作者：
Watney,JamesB;Agarwal,PratulK;Hammes-Schiffer,Sharon
通讯作者：
Hammes-Schiffer,Sharon