全局调控因子FNR对产肠毒素大肠杆菌生物学特性影响的研究
全局调控因子FNR对产肠毒素大肠杆菌生物学特性影响的研究
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DOI：
10.3969/j.issn.1008-0589.202112037
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发表时间：
2022
期刊：
影响因子：
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通讯作者：
李干武
中科院分区：
文献类型：
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作者：
杨延;毛曌;江丰伟;李干武
为研究全局调控因子富马酸盐和硝酸盐减少调控蛋白(FNR)对产肠毒素大肠杆菌(ETEC)生物学特性的影响,本研究通过Red同源重组方法构建了ETEC MD724-020菌株fnr基因的缺失株Δfnr及回补株Δfnr (pfnr),分别将ETEC野生株(WT)、Δfnr以及Δfnr(pfnr)同时接种于TSB液体培养基培养,测定fnr基因缺失前后ETEC的生长曲线,结果显示,与野生株相比,缺失fnr基因后其生长速率无明显变化。将3株菌分别接种于TSB固体培养基,通过测定游走直径比较分析野生株、缺失株和回补株的运动性,结果显示,与野生株相比,缺失株Δfnr的运动能力显著降低(P<0.05)。采用结晶紫法检测3株菌生物被膜(BF)形成能力,结果显示,相比WT和Δfnr(pfnr)株,缺失株Δfnr BF形成能力极显著下降(P<0.001)。将3株菌分别于含10%绵羊血的TSA平板上划线培养,进行溶血性试验,结果显示,相比WT和Δfnr(pfnr)株,Δfnr株溶血圈较野生株显著缩小。将3株菌分别与猪小肠上皮细胞IPEC-J2互作2 h后,通过平板计数法分析各菌株对该细胞的黏附能力,结果显示,与野生株相比,缺失株Δfnr对IPEC-J2细胞的黏附能力显著减弱(P<0.05)。提取上述互作后未黏附细菌的RNA,通过荧光定量PCR检测fnr基因缺失后对致病性ETEC相关毒力基因转录水平的影响,结果显示,与野生株相比, Δfnr株中eaeH、eltA和hlyA基因的转录水平均极显著下降(P<0.001)。本研究首次对全局调控因子FNR影响ETEC的运动性、溶血性、BF形成能力等生物学特性进行了研究,为进一步开展ETEC致病机理的研究提供了参考依据。