Fluorescent-based methods for gene knockdown and functional cardiac imaging in zebrafish.
Fluorescent-based methods for gene knockdown and functional cardiac imaging in zebrafish.
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DOI：
10.1007/s12033-013-9664-6
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发表时间：
2013-10
影响因子：
2.6
通讯作者：
Tanaka, Toshio
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Umemoto, Noriko;Nishimura, Yuhei;Shimada, Yasuhito;Yamanaka, Yukiko;Kishi, Seiya;Ito, Saki;Okamori, Kana;Nakamura, Yuuki;Kuroyanagi, Junya;Zhang, Zi;Zang, Liqing;Wang, Zhipeng;Nishimura, Norihiro;Tanaka, Toshio
关键词：
斑马鱼作为模型生物的一个显着优势是可以使用吗啉代反义寡核苷酸 (MO) 轻松进行基因敲除。然而，尽管控制了所有胚胎中 MO 溶液的注射量，但注射目标蛋白 MO 的斑马鱼形态通常表现出异质表型。我们开发了一种基于共注射用荧光团丽丝胺标记的对照 MO 来估计注射到每个活体吗啡啉中的 MO 量的方法。通过应用这种方法敲低斑马鱼中的心肌肌钙蛋白 T (tnnt2a)，我们可以有效地选择心率降低和心脏收缩受损的部分 tnnt2a 耗尽的斑马鱼。为了研究 tnnt2a morphant 的心脏损伤，我们使用 Bodipy-ceramide 进行了荧光心脏成像。心脏图像分析显示 tnnt2a 适度减少，舒张期扩张性受损，收缩和舒张速度降低。据我们所知，这是第一份分析 tnnt2a 在 tnnt2a 耗尽的活体动物心脏功能中的作用的报告。我们的组合方法可用于分析与人类心脏病相关的任何蛋白质的分子功能。本文的在线版本 (doi:10.1007/s12033-013-9664-6) 包含补充材料，可供授权用户使用。
A notable advantage of zebrafish as a model organism is the ease of gene knockdown using morpholino antisense oligonucleotide (MO). However, zebrafish morphants injected with MO for a target protein often show heterogeneous phenotypes, despite controlling the injection volume of the MO solution in all embryos. We developed a method for estimating the quantity of MO injected into each living morphant, based on the co-injection of a control MO labeled with the fluorophore lissamine. By applying this method for knockdown of cardiac troponin T (tnnt2a) in zebrafish, we could efficiently select the partial tnnt2a-depleted zebrafish with a decreased heart rate and impairment of cardiac contraction. To investigate cardiac impairment of the tnnt2a morphant, we performed fluorescent cardiac imaging using Bodipy-ceramide. Cardiac image analysis showed moderate reduction of tnnt2a impaired diastolic distensibility and decreased contraction and relaxation velocities. To the best of our knowledge, this is the first report to analyze the role of tnnt2a in cardiac function in tnnt2a-depleted living animals. Our combinatorial approach can be applied for analyzing the molecular function of any protein associated with human cardiac diseases. The online version of this article (doi:10.1007/s12033-013-9664-6) contains supplementary material, which is available to authorized users.
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影响因子：
3.7
作者：
Ahmad F;Banerjee SK;Lage ML;Huang XN;Smith SH;Saba S;Rager J;Conner DA;Janczewski AM;Tobita K;Tinney JP;Moskowitz IP;Perez-Atayde AR;Keller BB;Mathier MA;Shroff SG;Seidman CE;Seidman JG
通讯作者：
Seidman JG
影响因子：
2.7
作者：
Collins, Tony J.
通讯作者：
Collins, Tony J.
影响因子：
2.5
作者：
Delic, S.;Streif, S.;Kuehn, R.
通讯作者：
Kuehn, R.
影响因子：
3.5
作者：
Malone MH;Sciaky N;Stalheim L;Hahn KM;Linney E;Johnson GL
通讯作者：
Johnson GL
影响因子：
2.5
作者：
Hsiao, CD;Tsai, WY;Tsai, HJ
通讯作者：
Tsai, HJ