Quantitative real-time kinetics of optogenetic proteins CRY2 and CIB1/N using single-molecule tools.
Quantitative real-time kinetics of optogenetic proteins CRY2 and CIB1/N using single-molecule tools.
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DOI：
10.1016/j.ab.2014.04.023
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发表时间：
2014-08-01
影响因子：
2.9
通讯作者：
Irudayaraj J
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Cui Y;Choudhury SR;Irudayaraj J
在这项工作中，我们通过单分子工具在无细胞提取液中评估了两个光遗传蛋白变体(CIB1，CIBN)与其互补蛋白CRY2的相互作用。通过Förster共振能量转移(FRET)验证了蓝光诱导的CRY2和CIB1/N在活细胞中的共定位，建立了一种基于荧光相关光谱(FCS)的方法来定量测定提取蛋白的体外结合。我们的实验表明，与CIBN相比，CIB1与CRY2的偶联效率更高，这是因为它具有完整的蛋白质结构和较低的扩散速率，在300 S检测窗口内。
In this work we evaluate the interaction of two optogenetic protein variants (CIB1, CIBN) with their complementary protein CRY2 by single-molecule tools in cell-free extracts. After validating the blue light induced co-localization of CRY2 and CIB1/N by Förster resonance energy transfer (FRET) in live cells, a fluorescence correlation spectroscopy (FCS) based method was developed to quantitatively determine the in vitro association of the extracted proteins. Our experiments suggest that CIB1, in comparison with CIBN, possesses a better coupling efficiency with CRY2 due to its intact protein structure and lower diffusion rate within 300 s detection window.
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