Multiplex single-cell visualization of nucleic acids and protein during HIV infection.
Multiplex single-cell visualization of nucleic acids and protein during HIV infection.
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DOI：
10.1038/s41467-017-01693-z
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发表时间：
2017-12-01
影响因子：
16.6
通讯作者：
Sarafianos SG
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Puray-Chavez M;Tedbury PR;Huber AD;Ukah OB;Yapo V;Liu D;Ji J;Wolf JJ;Engelman AN;Sarafianos SG
同时显微镜下观察HIV的RNA、DNA和蛋白质的技术限制限制了这一领域的进展。为了满足这一需求，我们开发了一种显微镜方法，基于细胞的多重免疫荧光检测DNA，RNA和蛋白质（MICDDRP），这是基于分支的DNA原位杂交技术。MICDDRP能够同时对HIV（a）剪接和未剪接RNA，（B）细胞质和细胞核DNA，以及（c）Gag进行单细胞可视化。我们使用MICDDRP来可视化含有RNA和/或新生DNA的传入衣壳核心，并遵循逆转录动力学。我们还报道了从整合的前病毒DNA中产生的新生RNA的转录“爆发”，以及在共感染细胞中伴随的HIV-1、HIV-2转录。MICDDRP可用于同时检测多种病毒核酸中间体，表征宿主因子或药物对HIV生命周期步骤的影响，或其从潜伏状态的再活化，从而促进抗病毒药和潜伏再活化剂的开发。同时从单个整合位点的HIV转录的显微镜可视化的技术限制限制了该领域的进展。在这里，作者报告了一种分支DNA原位杂交方法，用于直接单细胞可视化HIV DNA，RNA和蛋白质。
Technical limitations in simultaneous microscopic visualization of RNA, DNA, and proteins of HIV have curtailed progress in this field. To address this need we develop a microscopy approach, multiplex immunofluorescent cell-based detection of DNA, RNA and Protein (MICDDRP), which is based on branched DNA in situ hybridization technology. MICDDRP enables simultaneous single-cell visualization of HIV (a) spliced and unspliced RNA, (b) cytoplasmic and nuclear DNA, and (c) Gag. We use MICDDRP to visualize incoming capsid cores containing RNA and/or nascent DNA and follow reverse transcription kinetics. We also report transcriptional “bursts” of nascent RNA from integrated proviral DNA, and concomitant HIV-1, HIV-2 transcription in co-infected cells. MICDDRP can be used to simultaneously detect multiple viral nucleic acid intermediates, characterize the effects of host factors or drugs on steps of the HIV life cycle, or its reactivation from the latent state, thus facilitating the development of antivirals and latency reactivating agents. Technical limitations in simultaneous microscopic visualization of HIV transcription from individual integration sites have curtailed progress in the field. Here the authors report a branched DNA in situ hybridization method for direct single-cell visualization of HIV DNA, RNA, and protein.
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影响因子：
6.4
作者：
Elkord, E;Williams, PE;Rowbottom, AW
通讯作者：
Rowbottom, AW
影响因子：
3.7
作者：
Hanley, Mary Beth;Lomas, Woodrow;Park, Emily
通讯作者：
Park, Emily
影响因子：
64.5
作者：
Linhoff MW;Garg SK;Mandel G
通讯作者：
Mandel G
DOI：
10.1073/pnas.94.5.1925
发表时间：
1997-03-04
影响因子：
11.1
作者：
Bleul, CC;Wu, LJ;Mackay, CR
通讯作者：
Mackay, CR
影响因子：
3.6
作者：
Klar, TA;Hell, SW
通讯作者：
Hell, SW