Regulation of dynein-driven microtubule sliding by the axonemal protein kinase CK1 in Chlamydomonas flagella.
Regulation of dynein-driven microtubule sliding by the axonemal protein kinase CK1 in Chlamydomonas flagella.
复制标题
DOI：
10.1083/jcb.200906168
复制
发表时间：
2009-09-21
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
Sale WS
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Gokhale A;Wirschell M;Sale WS
在体外将CK1添加到纯化轴突组中时，可以抑制动力蛋白的活性，可能是为了调节鞭毛弯曲的方式。对分离的纤毛/鞭毛轴突的实验分析表明，酪蛋白激酶I （CK1）参与了动力蛋白的调控。为了验证这一假设，我们开发了一种新的体外重组方法，使用纯化的重组莱因哈蒂衣藻CK1，以及来自瘫痪鞭毛突变体pf17的CK1缺失轴突蛋白，该突变体在径向辐条中存在缺陷，在动力蛋白驱动的微管滑动中受损。CK1抑制剂（DRB和CK1-7）和CK1的增溶恢复了pf17轴突的微管滑动，这与CK1的抑制作用是一致的。磷酸酶抑制剂微囊素- lr阻断了微管滑动的恢复，表明恢复所需的轴突磷酸酶保留在ck1缺失的轴突组中。用纯化的、重组的CK1重建贫轴突，以DRB -和CK1-7敏感的方式恢复微管滑动的抑制。相比之下，纯化的“激酶死亡”CK1未能恢复抑制作用。这些结果确定了轴突细胞CK1调节动力蛋白活性和鞭毛运动。
CK1 puts the brakes on dynein activity when added to purified axonemes in vitro, presumably to regulate how flagella bend. Experimental analysis of isolated ciliary/flagellar axonemes has implicated the protein kinase casein kinase I (CK1) in regulation of dynein. To test this hypothesis, we developed a novel in vitro reconstitution approach using purified recombinant Chlamydomonas reinhardtii CK1, together with CK1-depleted axonemes from the paralyzed flagellar mutant pf17, which is defective in radial spokes and impaired in dynein-driven microtubule sliding. The CK1 inhibitors (DRB and CK1-7) and solubilization of CK1 restored microtubule sliding in pf17 axonemes, which is consistent with an inhibitory role for CK1. The phosphatase inhibitor microcystin-LR blocked rescue of microtubule sliding, indicating that the axonemal phosphatases, required for rescue, were retained in the CK1-depleted axonemes. Reconstitution of depleted axonemes with purified, recombinant CK1 restored inhibition of microtubule sliding in a DRB– and CK1-7–sensitive manner. In contrast, a purified “kinase-dead” CK1 failed to restore inhibition. These results firmly establish that an axonemal CK1 regulates dynein activity and flagellar motility.
登录
查看更多内容
DOI：
10.1083/jcb.98.1.97
发表时间：
1984-01
期刊：
The Journal of cell biology
影响因子：
--
作者：
Kamiya R;Witman GB
通讯作者：
Witman GB
DOI：
10.1083/jcb.92.3.722
发表时间：
1982-03
期刊：
The Journal of cell biology
影响因子：
--
作者：
Brokaw CJ;Luck DJ;Huang B
通讯作者：
Huang B
影响因子：
3.4
作者：
Kotani, Norito;Sakakibara, Hitoshi;Oiwa, Kazuhiro
通讯作者：
Oiwa, Kazuhiro
影响因子：
--
作者：
Hayashi, Shuichi;Shingyoji, Chikako
通讯作者：
Shingyoji, Chikako
DOI：
10.1083/jcb.136.1.167
发表时间：
1997-01-13
期刊：
The Journal of cell biology
影响因子：
--
作者：
Habermacher G;Sale WS
通讯作者：
Sale WS