Dual-view plane illumination microscopy for rapid and spatially isotropic imaging.
Dual-view plane illumination microscopy for rapid and spatially isotropic imaging.
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DOI：
10.1038/nprot.2014.172
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发表时间：
2014-11
期刊：
影响因子：
14.8
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中科院分区：
文献类型：
--
作者：
我们描述了一个紧凑的双视图倒置选择性平面照明显微镜（diSPIM）的建设和使用的时间推移体积（4D）成像的活样品在亚细胞分辨率。我们的协议使生物学家与一些以前的显微镜经验组装一个diSPIM从市售部件，对准光学和测试系统性能，准备样品，并控制硬件和数据处理与我们的软件。与现有的光片显微镜协议不同，我们的方法不需要将样品包埋在琼脂糖中;相反，样品通常在盖玻片上制备。组织培养细胞和秀丽隐杆线虫胚胎被用作本协议中的例子;协议的成功实施导致在各向同性分辨率和采集速度高达几个体积每秒对这些样品。组装和验证diSPIM性能需要约6天，样品制备和数据采集需要5天，后处理需要3-8小时，具体取决于数据的大小。
We describe the construction and use of a compact dual-view inverted selective plane illumination microscope (diSPIM) for time-lapse volumetric (4D) imaging of living samples at subcellular resolution. Our protocol enables a biologist with some prior microscopy experience to assemble a diSPIM from commercially available parts, to align optics and test system performance, to prepare samples, and to control hardware and data processing with our software. Unlike existing light sheet microscopy protocols, our method does not require the sample to be embedded in agarose; instead, samples are prepared conventionally on glass coverslips. Tissue culture cells and Caenorhabditis elegans embryos are used as examples in this protocol; successful implementation of the protocol results in isotropic resolution and acquisition speeds up to several volumes per s on these samples. Assembling and verifying diSPIM performance takes ~6 d, sample preparation and data acquisition take up to 5 d and postprocessing takes 3–8 h, depending on the size of the data.
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