M2型巨噬细胞/小胶质细胞来源线粒体移植治疗小鼠脊髓损伤的实验研究
M2型巨噬细胞/小胶质细胞来源线粒体移植治疗小鼠脊髓损伤的实验研究
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DOI：
10.7507/1002-1892.202201040
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发表时间：
2022
期刊：
影响因子：
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通讯作者：
郑宪友
中科院分区：
文献类型：
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作者：
黄腾立;沈君劼;林俊卿;郑宪友
目的探讨M2型巨噬细胞/小胶质细胞来源线粒体移植治疗小鼠脊髓损伤的效果。方法取小鼠小胶质细胞(BV2细胞)分别采用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)、IL-4诱导其向M1型(M1组)及M2型(M2组)极化,以未作任何干预的细胞作为对照(M0组);光镜下观察细胞形态,免疫荧光染色[精氨酸酶1(Arginase 1,Arg-1)]及流式细胞术[诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)、Arg-1]鉴定极化后细胞类型,并通过MitoSox Red与DCFH-DA染色评估细胞线粒体功能。使用差速离心法提取M2组BV2细胞来源线粒体,Western blot法测量氧化磷酸酶链(oxidative phosphorylation,OXPHOS)内各相关复合物(复合物Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ与Ⅴ)的表达水平,并与M2型BV2细胞比较,以评估是否获得所需线粒体。取36只雌性C57BL/6小鼠随机分为3组(n=12),其中假手术组仅切除T_(10)椎板,脊髓损伤组及线粒体移植组制备T_(10)脊髓损伤模型后,于损伤节段分别注射线粒体储存液及M2型BV2细胞来源线粒体(100 μg)。术后采用BMS(Basso Mouse Scale)评分评价小鼠后肢运动功能,取材行免疫荧光染色(iNOS)、LEA-FITC染色及ELISA检测(VEGFA)。结果极化诱导后,M1组及M2组BV2细胞分别呈现M1型及M2型巨噬细胞特异性形态改变;免疫荧光染色示M2组的M2型巨噬细胞标志物Arg-1染色阳性表达高于M0组及M1组(P0.05)。Western blot法鉴定成功提取M2型BV2细胞来源线粒体。动物实验示,线粒体移植组术后21、28 d BMS评分高于脊髓损伤组(P<0.05);术后14 d损伤局部iNOS阳性细胞数低于脊髓损伤组(P<0.05),但仍高于假手术组(P<0.05); LEA阳性细胞较其余两组增多;VEGFA表达亦高于其余两组(P<0.05)。结论M2型巨噬细胞/小胶质细胞来源线粒体可通过促进损伤局部血管新生并抑制炎症性M1型巨噬细胞极化,促进小鼠脊髓损伤修复。