猪肉12-脂肪氧合酶催化结构域的表达、纯化及其酶学性质分析
猪肉12-脂肪氧合酶催化结构域的表达、纯化及其酶学性质分析
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DOI：
10.7506/spkx1002-6630-20180521-289
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发表时间：
2019
期刊：
影响因子：
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通讯作者：
徐为民
中科院分区：
文献类型：
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作者：
王晶晶;王婷;张新笑;卞欢;耿志明;李鹏鹏;王道营;徐为民
研究脂肪氧合酶(lipoxygenase,LOX)在猪肉贮藏、加工过程中对脂肪氧化及风味形成的作用机制。通过序列分析和聚合酶链式反应扩增获得了猪肉12-脂肪氧合酶催化结构域(12-lipoxygenase catalytic domain,12-LOXcd)的编码基因,采用大肠杆菌表达系统,经镍柱亲和层析和Superdex G200凝胶过滤层析纯化得到12-LOXcd蛋白,并研究其酶学性质。结果表明,构建的原核表达载体pMBP-12-LOXcd在大肠杆菌中成功可溶性表达了猪肉12-LOXcd,该重组蛋白经纯化可达电泳纯。12-LOXcd以亚油酸为底物的比活力为2826.7 U/mg,最适pH值为6.0,最适作用温度为30 ℃。亚油酸K_m为0.40 mmol/L,亚麻酸K_m为0.55 mmol/L,花生四烯酸K_m为4.15 mmol/L,表明最适底物为亚油酸。与大豆LOX相比,该酶在较高NaCl质量分数(9%)时仍保持活性稳定;对热较不稳定,在60 ℃条件下失活,但优于大豆LOX的热稳定性;此外,12-LOXcd的pH值稳定性也优于大豆LOX,在碱性条件下仍能保留部分活力。