鳖甲煎丸通过HIF-1α/NF-κB信号通路调控巨噬细胞极化的机制探讨
鳖甲煎丸通过HIF-1α/NF-κB信号通路调控巨噬细胞极化的机制探讨
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DOI：
10.13422/j.cnki.syfjx.20221201
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发表时间：
2022
期刊：
影响因子：
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通讯作者：
孙海涛
中科院分区：
文献类型：
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作者：
刘洋;何春雨;李彤;陈伟光;马琰昊;匡莹;贺松其;孙海涛
目的:探讨鳖甲煎丸通过调控巨噬细胞极化防治肝纤维化的作用和机制。方法:运用血清药理学方法,体外培养小鼠巨噬细胞RAW264.7,通过氯化钴(CoCl_2)刺激RAW264.7细胞建立体外缺氧模型,将细胞随机分为空白组、CoCl_2模型组(200 mmol·L~(-1))、鳖甲煎丸低(0.55 g·kg~(-1))、中(1.1 g·kg~(-1))、高(2.2 g·kg~(-1))和扶正祛瘀胶囊组(0.56 g·kg~(-1)扶正祛瘀胶囊)。采用细胞增殖与活性检测(CCK-8)法检测各组细胞增殖水平;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测巨噬细胞缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-6 mRNA表达水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测巨噬细胞极化相关蛋白与HIF-1α/核转录因子-κB(NF-κB)信号通路相关蛋白表达水平;细胞免疫荧光检测NF-κB信号通路相关蛋白、HIF-1α的分布及表达。结果:与空白组比较,CoCl_2刺激24 h后,RAW264.7细胞增殖受抑制明显(P<0.05);与模型组比较,用相应含药血清处理24 h后,各用药组能促进RAW264.7细胞增殖(P<0.05)。与空白组比较,模型组HIF-1α、IL-1β、IL-6 mRNA表达均有明显升高(P<0.05);与模型组比较,鳖甲煎丸与扶正祛瘀胶囊处理后能不同程度的降低巨噬细胞中HIF-1α、IL-1β、IL-6 mRNA的表达水平(P<0.05)。与空白组比较,模型组HIF-1α及M1巨噬细胞表型蛋白IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达明显升高(P< 0.05),M2巨噬细胞表型蛋白IL-10表达明显降低(P<0.05)。与模型组比较,鳖甲煎丸与扶正祛瘀胶囊组HIF-1α、IL-6、TNF-α蛋白表达降低(P<0.05),CD163、IL-10蛋白表达升高(P<0.05)。与空白组比较,模型组NF-κB p65、磷酸化(p)-NF-κB p65、磷酸化NF-κB抑制蛋白激酶α/β(p-IKKα/β)、磷酸化NF-κB抑制蛋白α(p-IκBα)蛋白表达明显升高(P<0.05);与模型组比较,鳖甲煎丸与扶正祛瘀胶囊组NF-κB p65、p-NF-κB p65、p-IKKα/β、p-IκBα蛋白表达明显降低(P<0.05)。与空白组比较,模型组促进HIF-1α和NF-κB p65的入核表达;与模型组比较,鳖甲煎丸和扶正祛瘀胶囊组能抑制HIF-1α和NF-κB p65的入核表达。结论:鳖甲煎丸可调控巨噬细胞极化,减轻缺氧环境下巨噬细胞相关炎症反应损伤,从而延缓肝纤维化进展,其机制可能与其调控HIF-1α/NF-κB信号通路有关。