Delivering defined amounts of purified protein with high precision into living cells.
Delivering defined amounts of purified protein with high precision into living cells.
复制标题
DOI：
10.1016/j.xpro.2020.100272
复制
发表时间：
2021-03-19
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
Vitriol EA
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Skruber K;Read TA;Vitriol EA
在这里，我们详细介绍了一个协议，使用电穿孔精确地提供定量的纯化蛋白到CAD细胞。该方法允许同时用蛋白质电穿孔一百万个细胞，具有高递送效率和低细胞死亡。此外，通过绕过正常的生物合成途径，蛋白质可以在没有翻译后修饰的复杂性的情况下进行研究，并且在转录反应可以启动之前。该协议将是有用的任何研究人员谁是有兴趣的蛋白质浓度依赖性细胞表型。有关本方案使用和执行的完整详细信息，请参阅。通过电穿孔可以将精确量的纯化蛋白质递送到细胞中递送的蛋白质与电穿孔反应中的浴浓度成比例蛋白质在电穿孔后保留功能性在此，我们详细描述了使用电穿孔将限定量的纯化蛋白质精确递送到CAD细胞中的方案。该方法允许同时用蛋白质电穿孔一百万个细胞，具有高递送效率和低细胞死亡。此外，通过绕过正常的生物合成途径，蛋白质可以在没有翻译后修饰的复杂性的情况下进行研究，并且在转录反应可以启动之前。该协议将是有用的任何研究人员谁是有兴趣的蛋白质浓度依赖性细胞表型。
Here, we detail a protocol using electroporation to precisely deliver defined amounts of purified protein into CAD cells. This method allows one million cells to be electroporated with protein simultaneously, with high delivery efficiency and low cell death. Further, by circumventing the normal biosynthetic pathway, proteins can be studied without the complication of post-translational modifications and before a transcriptional response can be initiated. This protocol will be useful for any researcher who is interested in protein concentration-dependent cellular phenotypes. For complete details on the use and execution of this protocol, please refer to. Precise amounts of purified protein can be delivered into cells by electroporation Delivered protein is proportional to bath concentration in electroporation reaction Protein retains functionality after electroporation Here, we detail a protocol using electroporation to precisely deliver defined amounts of purified protein into CAD cells. This method allows one million cells to be electroporated with protein simultaneously, with high delivery efficiency and low cell death. Further, by circumventing the normal biosynthetic pathway, proteins can be studied without the complication of post-translational modifications and before a transcriptional response can be initiated. This protocol will be useful for any researcher who is interested in protein concentration-dependent cellular phenotypes.
登录
查看更多内容
影响因子：
2.9
作者：
GRAZIADEI, L;BURFEIND, P;BARSAGI, D
通讯作者：
BARSAGI, D
叶酸蛋白直接通过在肌萎缩性侧索硬化症中突变的残基来促进微管生长。
DOI：
10.1016/j.cub.2017.10.002
发表时间：
2017-11-20
期刊：
Current biology : CB
影响因子：
--
作者：
Henty-Ridilla JL;Juanes MA;Goode BL
通讯作者：
Goode BL
影响因子：
12.6
作者：
Kim, Jeong Ah;Cho, Keunchang;Chang, Jun Keun
通讯作者：
Chang, Jun Keun
影响因子：
9.2
作者：
Skruber，Kristen;Warp，Peyton;Vitriol，Eric A.
通讯作者：
Vitriol，Eric A.
影响因子：
3.4
作者：
Demiryurek, Yasir;Nickaeen, Masoud;Shan, Jerry W.
通讯作者：
Shan, Jerry W.