低氧下K562细胞向红系分化进程_省略_miR_451a表达的相关性研究
低氧下K562细胞向红系分化进程_省略_miR_451a表达的相关性研究
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DOI：
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发表时间：
2020
期刊：
影响因子：
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通讯作者：
胡彩艳
中科院分区：
文献类型：
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作者：
付成冰;刘芳;牛志鹏;胡彩艳
探讨低氧下人慢性髓细胞性白血病 K562细胞向红系分化进程中 GATA 结合蛋白 1（GATA.binding protein-1，GATA-1）与微小 RNA-451a（microRNA-451a，miR-451a）表达的相关性。方法：将 K562细胞分为常氧组和低氧（1% O2）组，经 40 μmol/L 氯化血红素分别诱导分化至 48和 72 h。RT-qPCR 检测 γ-珠蛋白（γ-globin）的 mRNA表达，联苯胺染色观察细胞血红蛋白生成情况，流式细胞术检测 CD235a的表达水平，验证 K562细胞红系分化模型是否复制成功。在 K562细胞向红系分化的不同时点，采用 Western blot检测两组细胞 GATA-1的蛋白表达情况；采用 RT-qPCR 检测两组细胞 GATA-1 mRNA 和 miR-451a的表达水平并进行相关性分析。检测 GATA-1过表达组、干扰组和阴性对照组 K562细胞的红系分化指标，同时采用瑞氏-吉姆萨染色法分析上述组别细胞形态学的变化，明确 GATA-1过表达和抑制后 K562细胞的红系分化情况。RT-qPCR检测 GATA-1过表达和抑制后 miR-451a的表达变化。结果：两组细胞分化 48 h和 72 h后，γ-globin表达量、联苯胺染色阳性率和 CD235a表达量均显著高于 0h（P<0. 05），且低氧组 72 h的 γ-globin表达量、联苯胺染色阳性率和 CD235a表达量均显著高于常氧组（P<0. 05）。低氧组 GATA-1 mRNA和 miR-451a的表达水平随红系分化过程均呈现上升趋势（P<0. 05），并在 72 h均显著高于常氧组（P<0. 05）。相关性分析结果显示，低氧下 GATA-1 mRNA 与 miR-451a的表达呈正相关（P<0. 01）。GATA-1慢病毒感染 K562细胞 72 h后，低氧下过表达组 γ-globin表达量、联苯胺染色阳性率、CD235a表达量及体积增大、核偏移和核缩小的细胞数均显著高于阴性对照组（P<0. 05）；72 h干扰组 γ-globin表达量、联苯胺染色阳性率、CD235a表达量及体积增大、核偏移和核缩小的细胞数均显著低于阴性对照组（P<0. 05）。与阴性对照组相比，低氧下过表达GATA-1 后，72 h 时 miR-451a 的表达显著增高（P<0. 05）；干扰 GATA-1 后，72 h 时 miR-451a 的表达显著降低（P<0. 05）。结论：低氧通过诱导 GATA-1表达增高而上调 miR-451a，从而促进 K562细胞向红系分化。.