基于CRISPR/cas9系统高效编辑小鼠Galt基因
基于CRISPR/cas9系统高效编辑小鼠Galt基因
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DOI：
10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2020-0237
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发表时间：
2020
期刊：
影响因子：
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通讯作者：
高进涛
中科院分区：
文献类型：
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作者：
岳鹏鹏;郭俊璠;于鸿浩;付灿;王小燕;高进涛
GALt基因突变是人类I型半乳糖血症的主要病因。拟通过CRISPR/cas9系统打靶小鼠Galt基因以模拟人GALt基因突变,从而为建立精准模拟I型半乳糖血症的动物模型奠定基础。首先分析了我国I型半乳糖血症GALt基因的致病突变位点,并将其定位在小鼠Glat基因上,作为小鼠Galt基因的拟突变位点,然后根据拟突变位点区域的序列设计了sgRNA导向序列,构建sgRNA表达质粒,将其与cas9表达质粒共转染小鼠3T3细胞,通过嘌呤霉素和杀稻瘟菌素筛选阳性转染细胞,提取阳性细胞基因组DNA,PCR扩增打靶位点的DNA片段,通过TA克隆测序鉴定基因编辑情况并分析编辑效率。结果表明,3个sgRNA导向序列均可以通过CRISPR/Cas9系统高效编辑小鼠Galt基因,编辑效率为100%。