Colorimetric Determination of Adenylation Domain Activity in Nonribosomal Peptide Synthetases by Using Chrome Azurol S.
Colorimetric Determination of Adenylation Domain Activity in Nonribosomal Peptide Synthetases by Using Chrome Azurol S.
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DOI：
10.1002/cbic.202200668
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发表时间：
2023-03-01
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
中科院分区：
文献类型：
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作者：
腺化结构域是导致非核糖体多肽结构复杂性的主要因素，因为它们具有不同但严格的底物选择。为了确定这些专用生物催化剂的底物专一性，已经进行了几种体外试验，但高灵敏度往往伴随着繁琐的程序、昂贵的试剂或对辅助酶的要求。在这里，我们描述了一种简单的方案，它基于从铁和铬天青S之间预先形成的显色络合物中去除铁。腺苷基化活性可以快速跟随630 nm处的吸光度下降，可见，从蓝色到橙色的显著变化。盗铁：将铬天青S与三价铁形成的显色络合物重新定位，用于体外监测腺苷化结构域的底物专一性。这种方法避免了对昂贵的共底物或辅助酶的要求，也可以应用于嵌入在整个模块中的腺化结构域。
Adenylation domains are the main contributor to structural complexity among nonribosomal peptides due to their varied but stringent substrate selection. Several in vitro assays to determine the substrate specificity of these dedicated biocatalysts have been implemented, but high sensitivity is often accompanied by the cost of laborious procedures, expensive reagents or the requirement for auxiliary enzymes. Here, we describe a simple protocol that is based on the removal of ferric iron from a preformed chromogenic complex between ferric iron and Chrome Azurol S. Adenylation activity can be rapidly followed by a decrease in absorbance at 630 nm, visualized by a prominent color change from blue to orange. Stealing iron: The chromogenic complex between Chrome Azurol S and ferric iron was repurposed to monitor the substrate specificity of adenylation domains in vitro. This assay avoids the requirement for expensive co-substrates or auxiliary enzymes and can also be applied for adenylation domains that are embedded in entire modules.
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影响因子：
21.8
作者：
Niquille, David L.;Hansen, Douglas A.;Hilvert, Donald
通讯作者：
Hilvert, Donald
DOI：
10.1111/j.1432-1033.1995.747_a.x
发表时间：
1995-12-15
期刊：
EUROPEAN JOURNAL OF BIOCHEMISTRY
影响因子：
--
作者：
Ballio, A;Bossa, F;Segre, AL
通讯作者：
Segre, AL
影响因子：
2.9
作者：
Katano, Hajime;Tanaka, Rina;Hamano, Yoshimitsu
通讯作者：
Hamano, Yoshimitsu
影响因子：
1.6
作者：
Katano, Hajime;Watanabe, Hiro;Hamano, Yoshimitsu
通讯作者：
Hamano, Yoshimitsu
DOI：
10.1007/978-1-4939-3375-4_5
发表时间：
2016-01-01
期刊：
NONRIBOSOMAL PEPTIDE AND POLYKETIDE BIOSYNTHESIS: METHODS AND PROTOCOLS
影响因子：
--
作者：
Maruyama, Chitose;Niikura, Haruka;Hamano, Yoshimitsu
通讯作者：
Hamano, Yoshimitsu