Molecular cloning of G1 phase mRNAs from a subtractive G1 phase cDNA library.
Molecular cloning of G1 phase mRNAs from a subtractive G1 phase cDNA library.
复制标题
从消减 G1 期 cDNA 文库中分子克隆 G1 期 mRNA。
DOI：
10.1139/o93-055
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发表时间：
1993
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
Bird,RC
中科院分区：
文献类型：
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作者：
Wu,G;Su,S;Kung,TY;Bird,RC
Plusieurs ARNm 特定于 G1 阶段，可识别不同的正常细胞或在血清诱导基础上进行转化，并在细胞周期中储存细胞的租用。 Cendant, ces ARNm peuvent ne pas contenir les produits de certains gènes importants expprimés durant G1 dans les cellules se divisant continuellement.真核细胞的细胞周期与细胞周期激酶相关的控制体系相结合，在细胞周期的 G1 期迟缓和 G2 期持续。 L'hybridation sustractive a été utilisée pour constituer une librairie d'ADNc ayant une valeurR0télevée et richie en sésequences expprimées durant G1 stage avant lepass of l'étape de la stage G1. 阶段 G1。在 G1 阶段获得细胞，在继续分裂中获得细胞群，在 G1 阶段获得细胞 HeLa，在淘析离心机上分离，在 S 阶段获得细胞，在胸腺嘧啶脱氧核苷双块套件中获得 très 同步微淘离心机。 G1 相 ADNc 的源库是 G1 相 ADNc 分离的准备程序，使用 10 份 S 相上 ADNc 的量。ADNc 简单化了 G1 相的色谱图，并与寡聚 (dA) 色谱分离。该图书馆是利用人口资源来获取价值的图书馆。两轮抄写后，20 个克隆正面出现。 L'analysis par Transfert Northern démontre que 6 de ces clones sont expprimés en plus grande quantité durant la stage que durant la stage S. La comparaison de la séquence nucléotidique de chacun de ces clones aux séquences dans la base de données GenBank révèle quehG1.11est très 同源物(99%) au gène de la chaîne légère de l'apoferritine et les cloneshG1.6,hG1.10,hG1.17ethG1.18correspondent à de nouveaux gènes dont l'expressenge durant la period G1 et qui sont 71 à 95% 同源物 à quatre familles de gènes de核糖体蛋白质。最重要的克隆，hG1.1，编码一种多肽，不能用于维护。 Une étude Suplémentaire de ces ARNm plus nombreux en Phase G1 est requise afin de terminer rôle dans le déroulement du Cycle cellulaire et dans l'étape de la Phase G1 que les cellules franchissent lors de la mitose. Mots clés: 细胞周期、阶段G1，杂交源，克隆 d'ADNc，核糖体蛋白，脱铁铁蛋白链，细胞 HeLa。[Traduit par la rédaction]
Plusieurs ARNm spécifiques de la phase G1 ont été identifiés dans diverses cellules normales ou transformées en se basant sur l'induction par le sérum et la rentrée de cellules au repos dans le cycle cellulaire. Cependant, ces ARNm peuvent ne pas contenir les produits de certains gènes importants exprimés durant la phase G1 dans les cellules se divisant continuellement. Le cycle cellulaire des eucaryotes comporte deux étapes de contrôle régies par la kinase dépendante de la cycline que les cellules franchissent durant la phase G1 tardive et la phase G2 de chaque cycle. L'hybridation soustractive a été utilisée pour constituer une librairie d'ADNc ayant une valeurR0télevée et enrichie en séquences exprimées durant la phase G1 avant le passage de l'étape de contrôle de la phase G1. Afin d'obtenir des cellules en phase G1 à partir de populations cellulaires en division continuelle, des cellules HeLa en phase G1 ont été isolées par élutriation centrifuge, puis des cellules en phase S très synchrones ont été obtenues à la suite d'un double blocage par la thymidine suivi d'une élutriation centrifuge. Une librairie soustractive d'ADNc en phase G1 a été préparée en isolant les ADNc de la phase G1 en utilisant une quantité 10 fois supérieure d'ARNm de la phase S. Les ADNc simples brins de la phase G1 ont été isolés par chromatographie sur oligo(dA). La librairie a été criblée en utilisant une population de sondes soustractives ayant une valeurR0télevée. Après deux cycles de criblage, 20 clones positifs ont été obtenus. L'analyse par transfert Northern démontre que six de ces clones sont exprimés en plus grande quantité durant la phase G1 que durant la phase S. La comparaison de la séquence nucléotidique de chacun de ces clones aux séquences dans la base de données GenBank révèle quehG1.11est très homologue (99%) au gène de la chaîne légère de l'apoferritine et les cloneshG1.6,hG1.10,hG1.17ethG1.18correspondent à de nouveaux gènes dont l'expression augmente durant la phase G1 et qui sont 71 à 95% homologues à quatre familles de gènes de protéines ribosomiques. Le dernier clone,hG1.1, code un polypeptide très chargé inconnu jusqu'à maintenant. Une étude supplémentaire de ces ARNm plus nombreux en phase G1 est requise afin de déterminer leur rôle dans le déroulement du cycle cellulaire et dans l'étape de contrôle de la phase G1 que les cellules franchissent lors de la mitose.Mots clés: cycle cellulaire, phase G1, hybridation soustractive, clonage d'ADNc, protéines ribosomiques, chaîne légère de l'apoferritine, cellules HeLa.[Traduit par la rédaction]