Integration of multiplex PCR and CRISPR-Cas allows highly specific detection of multidrug-resistant Acinetobacter Baumannii
Integration of multiplex PCR and CRISPR-Cas allows highly specific detection of multidrug-resistant Acinetobacter Baumannii
复制标题
多重 PCR 和 CRISPR-Cas 的集成可实现对多重耐药鲍曼不动杆菌的高度特异性检测
DOI：
10.1016/j.snb.2021.129600
复制
发表时间：
2021-05
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
谢国明
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
王玉凤;郭永灿;张力;杨宇君;杨双双;杨柳;陈华剑;刘成桂;李俊杰;谢国明
细菌鉴定和表型药敏试验（p-AST）在很大程度上限制了临床患者及时抗感染治疗。本研究建立了一种快速检测多重耐药鲍曼不动杆菌（MDRAB）的CRISPR-Cas芯片平台。该平台采用多重PCR扩增策略，可同时扩增鲍曼不动杆菌（Acinetobacter baumannii，A.鲍曼不动杆菌），伴随LbaCas 12 a的无差别单链DNA酶活性，以产生多重PCR产物的单一荧光信号。对A.鲍曼不动杆菌在2 h内完成检测，检出限可达50 CFU/mL。此外，我们还证明了区分引物二聚体的特异性。这些发现共同证明了CRISPR-Cas 12 a方法在高通量和高特异性的多基因检测中的最终潜力。鉴于CRISPR-Cas 12 a平台的多功能性和普适性，预计该研究将进一步推动其在多重耐药菌诊断和治疗中的应用。
Bacterial identification and phenotypic antibiotic susceptibility test (p-AST) limit timely anti-infection treatment of patients in clinic to a large extent. Here, we develop a rapid platform integrated multiplex PCR with CRISPR-Cas array to detect multidrug-resistantAcinetobacter baumannii(MDRAB). The platform relies on multiplex PCR amplification strategy which can simultaneously amplify the house-keeping gene and 4 β-lactamase genes ofAcinetobacter baumannii(A. baumannii), accompanying with the indiscriminate single-stranded DNase activity of LbaCas12a to generate a single fluorescent signal for multiplex PCR products. The genotypic antibiotic susceptibility test (g-AST) ofA. baumanniiwas completed within 2 h, with a detection limit down to 50 CFU/mL. In addition, we also proved the specificity to differentiate primer dimers. These findings jointly demonstrate the ultimate potential of the CRISPR-Cas12a method for multiple genes detection with high throughput and high specificity. Given the versatility and universality of CRISPR-Cas12a platform, it is expected that this research will further promote its application in the diagnosis and treatment of multidrug-resistant bacteria.
登录
查看更多内容
CRISPR-Cas12a辅助核酸检测
影响因子：
33.5
作者：
Li SY;Cheng QX;Wang JM;Li XY;Zhang ZL;Gao S;Cao RB;Zhao GP;Wang J
通讯作者：
Wang J
DOI：
10.1039/d0ay01661f
发表时间：
2020-10
期刊：
Analytical methods : advancing methods and applications
影响因子：
--
作者：
Zhang Zhang-Zhang;Juan Yao;Xiaoling Huang;Li Zhang;Ting Wang;Zhi Weng;G. Xie
通讯作者：
Zhang Zhang-Zhang;Juan Yao;Xiaoling Huang;Li Zhang;Ting Wang;Zhi Weng;G. Xie
影响因子：
14.9
作者：
CHAMBERLAIN, JS;GIBBS, RA;CASKEY, CT
通讯作者：
CASKEY, CT
影响因子：
56.9
作者：
Chen, Janice S.;Ma, Enbo;Doudna, Jennifer A.
通讯作者：
Doudna, Jennifer A.
中国某教学医院耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌的特征
影响因子：
5.2
作者：
Chang Y;Luan G;Xu Y;Wang Y;Shen M;Zhang C;Zheng W;Huang J;Yang J;Jia X;Ling B
通讯作者：
Ling B