Protein modification to probe intradynein interactions and in vivo redox state.
Protein modification to probe intradynein interactions and in vivo redox state.
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蛋白质修饰以探测内动力蛋白相互作用和体内氧化还原状态。
DOI：
10.1007/978-1-59745-490-2_5
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发表时间：
2007
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
King,StephenM
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Wakabayashi,Ken-ichi;Sakato,Miho;King,StephenM
动力蛋白是高度复杂的分子马达，包含多种有助于马达、调节和货物结合活动的组件。在纤毛/鞭毛内，这些酶包含与双联微管相关的内臂和外臂。在本章中，我们描述如何从单细胞绿藻衣藻的鞭毛中纯化外动力蛋白臂，衣藻是该运动类中特征最鲜明的成员之一。我们还详细介绍了通过化学交联识别涉及动力蛋白成分的相互作用的方法，以及最近开发的技术来评估与多种生物体的轴丝动力蛋白相关的硫氧还蛋白样蛋白的体内氧化还原状态。最后，我们描述了如何使用重组蛋白通过印迹纯化从血清中纯化高度特异性的抗体。尽管这些方法是为分析衣藻鞭毛动力蛋白而设计的，但它们应该很容易适用于其他系统的研究。
Dyneins are highly complex molecular motors containing multiple components that contribute motor, regulatory and cargo-binding activities. Within cilia/flagella, these enzymes comprise the inner and outer arms associated with the doublet microtubules. In this chapter, we describe how to purify the outer dynein arm from flagella of the unicellular green algaChlamydomonas, which is one of the best characterized members of this motor class. We also detail the methods that we use to identify interactions involving dynein components by chemical cross-linking and a recently developed technique to assess the in vivo redox state of thioredoxin-like proteins that are associated with axonemal dyneins from a wide range of organisms. Finally, we describe how to purify highly specific antibodies from serum by blot purification using recombinant proteins. Although designed for analysis ofChlamydomonasflagellar dyneins, these approaches should be readily adaptable to the study of other systems.
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作者：
G. Witman
通讯作者：
G. Witman
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Mohri, H
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DOI：
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发表时间：
1991
期刊：
The Journal of biological chemistry
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--
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King,SM;Wilkerson,CG;Witman,GB
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Witman,GB
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Olmsted,JB
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