Identification of cellular proteins binding to the scrapie prion protein.
Identification of cellular proteins binding to the scrapie prion protein.
复制标题
鉴定与痒病朊病毒蛋白结合的细胞蛋白。
DOI：
10.1021/bi00476a029
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发表时间：
1990
期刊：
影响因子：
2.9
通讯作者：
Prusiner,SB
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Oesch,B;Teplow,DB;Stahl,N;Serban,D;Hood,LE;Prusiner,SB
材料和方法材料。转移膜购自Bio-Rad，里士满，加利福尼亚州（硝酸纤维素，0.45/im）。使用Na 125 I（无载体;阿默舍姆，阿灵顿Heights，IL）和碘珠（Pierce，Rockford，IL）进行放射性碘标记。从Pharmacia，密尔沃基，WI获得两性酚（pH 3.5-10）。用于电泳的化学品购自Bio-Rad。蛋La-卵磷脂获自Avanti-Polar，Pelham，AL。HPLC柱（Brownlee）与Rainin HPLC系统一起使用。单克隆抗体购自阿默舍姆（抗GFAP、抗68 kDa和抗160 kDa神经丝）或ICN（抗肌动蛋白）。与碱性磷酸酶偶联的抗兔或小鼠IG抗体获自Promega，麦迪逊，WI。异丙基/3-D-硫代-吡喃半乳糖苷（IPTG）购自Sigma，St. Louis，MO。胶质细胞酸性蛋白（GFAP）cDNA克隆是N.科万。用于SDS-PAGE的分子量标准品获自Bio-Rad;分子量（X10 - 3）如下：胰蛋白酶抑制剂，21;碳酸酐酶，31;卵清蛋白，43;牛血清白蛋白，66;磷酸化酶B，97; β-半乳糖苷酶，116;和肌球蛋白，200。用Western blotting法测定神经元特异性蛋白的分子量标记（68 K和160 K）。
Materials and Methods Materials. Transfer membranes were purchased from Bio-Rad, Richmond, CA (nitrocellulose, 0.45/im). Na125I (carrier-free; Amersham, Arlington Heights, IL) and iodobeads (Pierce, Rockford, IL) were used for radioiodination. Ampholines (pH 3.5-10) were obtained from Pharmacia, Milwaukee, WI. Chemicals for electrophoresis were purchased from Bio-Rad. Egg La-lecithin was obtained from Avanti-Polar, Pelham, AL. HPLC columns (Brownlee) were used with a Rainin HPLC system. Monoclonal antibodies were purchased from Amersham (anti-GFAP, anti-68 kDa, and anti-160 kDa neurofilaments) or ICN (anti-actin). Anti-rabbit or mouse Ig antibodies coupled to alkaline phosphatase were obtained from Promega, Madison, WI. Isopropyl/3-D-thio-galactopyranoside (IPTG) was purchased from Sigma, St. Louis, MO. The glial fibrillary acidic protein (GFAP) cDNA clone was a generous gift of Dr. N. Cowan. Molecular weight standards for SDS-PAGE were obtained from Bio-Rad; the molecular weights (X10~ 3) were as follows: trypsin inhibitor, 21; carbonic anhydrase, 31; ovalbumin, 43; bovine serum al-bumin, 66; phosphorylase b, 97;/3-galactosidase, 116; and myosin, 200. The positions for neurofilamentproteins used as molecular weight markers (68K and 160K) were determined by Western blotting.
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Biochemical and Biophysical Research Communications - BBRC
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P. Traub
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通讯作者：
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Lentz,TL