屋尘螨8类变应原(Der p8)克隆表达、纯化及免疫原性鉴定
屋尘螨8类变应原(Der p8)克隆表达、纯化及免疫原性鉴定
复制标题
DOI：
10.3969/j.issn.1002-2694.2022.00.009
复制
发表时间：
2022
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
刘晓宇
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
刘慧婷;袁如意;陈献雄;刘晓宇
目的对屋尘螨(Dermatophagoides pteronyssinus)8类变应原Der p 8进行克隆表达、纯化及免疫原性分析,并用生物信息学方法分析其同源性。方法根据已知Der p8基因序列,设计PCR引物;提取屋尘螨总RNA,逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增得到Der p 8的cDNA片段,以cDNA和设计的引物进行PCR扩增;扩增产物连接至T载体并转化入大肠埃希菌(E.coli Top10)中,培养后挑选阳性单克隆菌落测序。测序正确后,转入表达载体pET-32 a,经酶切鉴定、测序后转入表达菌BL21,大量表达重组蛋白Der p 8。用亲和层析法纯化后进行免疫印迹分析(Western blotting)。利用生物信息学方法分析Der p8基因的同源性。结果酶切鉴定显示Der p 8表达载体构建成功,目的基因分子量约为700 bp;SDS-PAGE电泳显示Der p8重组蛋白成功表达,分子量约为38 kD,且主要以包涵体形式存在。Western blotting结果显示Der p 8重组蛋白具有免疫原性。同源性分析结果显示本实验克隆Der p8基因与NCBI基因库的Der p8基因同源性为76.97%。结论本实验成功克隆表达并纯化出具有免疫原性的Der p 8重组蛋白,为临床上应用重组蛋白于诊断和治疗提供理论基础。