MYO1D对自噬溶酶体生成机制的研究
MYO1D对自噬溶酶体生成机制的研究
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DOI：
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发表时间：
2020
期刊：
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通讯作者：
米娜
中科院分区：
文献类型：
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作者：
冯学召;伊力亚斯·艾萨;雷秀英;陈倩;古丽努尔·阿不力米提;米娜
目的探讨肌球蛋白1D （myosin 1d,MYO1D）对自噬溶酶体形成的影响及其作用机制。方法免疫荧光观察大鼠肾上皮（normal rat kidney,NRK）细胞内MYO1D蛋白质与自噬体标志性蛋白质微管相关蛋白1轻链3（microtubule associated protein 1 light Chain 3, LC3）的共定位关系;CRISPR-Cas9技术敲除NRK细胞中MYO1D基因,并分为MYO1D基因未敲除组,即NC组（non-specific control, NC）与MYO1D基因敲除组,即KO组（myosin1d knockout, KO）;免疫荧光观察两组细胞中LC3与溶酶体关联膜蛋白1 （lysosomal associated membrane protein 1, LAMP1）的共定位关系;蛋白质免疫印迹检测两组细胞自噬底物蛋白P62（p62/sequestosom-1,p62）的表达水平;对两组细胞进行荧光融合蛋白GFP-RFP-LC3（GFP-RFP-LC3）转染,在激光共聚焦显微镜下示踪自噬溶酶体的形成,并利用溶酶体标记探针（lyso-tracker red）检测溶酶体活性的变化。结果在NRK细胞中,可观察到MYO1D与LC3存在显著的共定位关系;激光共聚焦显微镜下可观察到KO组中自噬溶酶体的形成受阻,荧光拟合程度降低;与NC组比较KO组P62蛋白表达水平显著升高,差异具有统计学意义（P<0.01）;KO组内绿色荧光与红色荧光共同标记的自噬体比例升高;与NC组比较KO组溶酶体活性增强,差异具有统计学意义（P<0.05）。结论 MYO1D参与并影响自噬溶酶体的生成过程,其作用机制可能是MYO1D参与了自噬体转运至溶酶体并与之融合。