CRISPR/Cas9介导的LATS1 /2敲除抑制卵巢癌细胞ES-2增殖

CRISPR/Cas9介导的LATS1 /2敲除抑制卵巢癌细胞ES-2增殖
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DOI：
10.13865/j.cnki.cjbmb.2019.05.14
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发表时间：
2019
期刊：
中国生物化学与分子生物学报
影响因子：
--
通讯作者：
潘巍巍
潘巍巍
中科院分区：
其他
文献类型：
--
作者：
林仙德;胡灵灵;陈子彦;胡汉寅;杨柳青;王卓文;钱若文轩;刘胜兵;潘巍巍

文献摘要

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Hippo信号通路在哺乳动物肝脏发育、动态平衡、再生和疾病中发挥非常重要的作用。大肿瘤抑制基因1 /2(large tumor suppressor 1 /2,LATS1 /2)激酶是Hippo信号通路的关键激酶,可以磷酸化YES相关蛋白(yes-associated protein,YAP),从而调节YAP的核质定位和降解。本文采用CRISPR/Cas9方法构建慢病毒介导的Last1 /2基因敲除的载体,通过包装、感染和嘌呤霉素筛选,获得LATS1 /2部分敲除的人卵巢癌ES-2和H08910细胞,免疫印迹方法检测LATS1 /2表达明显减少。细胞增殖实验检测LATS1 /2缺失明显抑制ES-2和HO8910细胞增殖。软琼脂克隆形成实验表明,LATS1 /2缺失抑制卵巢癌ES-2细胞的克隆形成能力。细胞划痕和Transwell实验证明, LATS1 /2缺失明显抑制卵巢癌ES-2细胞迁移。流式细胞检测发现,LATS1 /2敲除促进卵巢癌ES-2细胞凋亡并影响细胞周期。裸鼠成瘤实验表明,LATS1 /2缺失明显抑制体内肿瘤组织增殖。分子机制研究表明,LATS1 /2敲除促进卵巢癌ES-2细胞中胶原I型α1(collagen type I α1,ColIα1)基因表达量增加,在卵巢癌ES-2细胞中同时敲除LATS1 /2和COL1A1,可以促进细胞克隆形成。综上结果,人卵巢癌ES-2细胞中LATS1 /2缺失能促进COL1A1表达增加,从而抑制细胞增殖、转移和克隆形成,并影响细胞周期和促进细胞凋亡。