Direct sensing of 5-methylcytosine by polymerase chain reaction.
Direct sensing of 5-methylcytosine by polymerase chain reaction.
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DOI：
10.1002/anie.201403745
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发表时间：
2014-07-28
影响因子：
16.6
通讯作者：
Marx, Andreas
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Aschenbrenner, Joos;Drum, Matthias;Topal, Huesnue;Wieland, Markus;Marx, Andreas
通过胞嘧啶甲基化产生5-甲基胞嘧啶（5 mC）的基因的表观遗传控制对人类发育和疾病具有根本意义。DNA甲基化模式改变的分析是癌症诊断和肿瘤学的新兴工具。在这里，我们报告了两种热稳定DNA聚合酶，即来自水生栖热菌的DNA聚合酶KlenTaq和来自Kodakaraensis的KOD DNA聚合酶，能够从5 mC比从未甲基化的C更有效地延伸3′-错配引物链。 通过产生具有进一步改进的5 mC/C辨别特性的DNA聚合酶突变体及其在直接来自未处理的人类基因组DNA的新型甲基化特异性PCR方法中的成功应用，推进了该特征。
The epigenetic control of genes by the methylation of cytosine resulting in 5-methylcytosine (5mC) has fundamental implications for human development and disease. Analysis of alterations in DNA methylation patterns is an emerging tool for cancer diagnostics and prognostics. Here we report that two thermostable DNA polymerases, namely the DNA polymerase KlenTaq derived from Thermus aquaticus and the KOD DNA polymerase from Thermococcus kodakaraensis, are able to extend 3′-mismatched primer strands more efficiently from 5 mC than from unmethylated C. This feature was advanced by generating a DNA polymerase mutant with further improved 5mC/C discrimination properties and its successful application in a novel methylation-specific PCR approach directly from untreated human genomic DNA.
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