Myosin Light Chain Isoforms and Their Phosphorylation in Arterial Smooth Muscle
Myosin Light Chain Isoforms and Their Phosphorylation in Arterial Smooth Muscle
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动脉平滑肌中肌球蛋白轻链亚型及其磷酸化
作者：
Ferenc Erd±di;M. Bárány;K. Bárány
动脉平滑肌肌球蛋白含有非磷酸化和磷酸化的轻链，在20,000分子量水平的二维库马斯蓝染色凝胶电泳图上显示为4个点（按等电点递减顺序称为4到1点）。抗轻链识别所有4个轻链点上的蛋白质。通过抑制肌球蛋白轻链激酶和加入磷酸酶，肌肉匀浆中的轻链完全去磷酸化，在二维凝胶电泳图上形成2个斑点；这两个斑点在免疫印迹上都可见。平滑肌的刺激（K+或拉伸）导致轻链磷酸化增加。凝胶电泳图的放射自显影显示，放射性成分包含在点3,2,1和具有较低等电点的附加点，称为点0。磷氨基酸分析表明，斑点3和1含有磷丝氨酸，而斑点2和0含有磷丝氨酸和磷苏氨酸。3号和1号点胰蛋白酶消化蛋白的二维磷酸肽图谱主要显示2条肽；而从2号和0号点来看，它显示了5个肽。对金黄色葡萄球菌V8酶切获得的磷酸肽进行十二烷基硫酸钠凝胶电泳，得到斑点3和2的相同图谱，与斑点1和0的相同图谱不同。结果表明，动脉平滑肌肌球蛋白含有2种不同氨基酸序列的非磷酸化20,000道尔顿轻链异构体，每种异构体均可被单磷酸化和二磷酸化。
Arterial smooth muscle myosin contains nonphosphorylated and phosphorylated light chains that appear as 4 spots on two-dimensional, Coomassie blue-stained gel electrophoretograms at the 20,000-molecular weight level (referred to as spots 4 through 1 in order of decreasing isoelectric points). Anti-light chain recognizes the proteins in all 4 light chain spots. Complete dephosphorylation of light chain in muscle homogenate, by inhibiting myosin light chain kinase and by adding phosphatase, leads to 2 spots on two-dimensional gel electrophoretograms; both spots are visible on immunoblots. Stimulation (K+ or stretch) of smooth muscle results in increased light chain phosphorylation. Autoradiography of the gel electrophoretograms reveals that radioactive components are contained in spots 3, 2, 1, and in an additional spot with lower isoelectric point, referred to as spot 0. Phosphoamino acid analysis shows that spots 3 and 1 contain phosphoserine, whereas spots 2 and 0 contain phosphoserine and phosphothreonine. Two-dimensional phosphopeptide mapping of the trypsin-digested proteins from spots 3 and 1 shows predominantly 2 peptides; whereas from spots 2 and 0, it shows 5 peptides. Sodium dodecyl sulfate gel electrophoresis of the phosphopeptides obtained with Staphylococcus aureus V8 digestion gives identical maps for spots 3 and 2, which are different from the identical maps of spots 1 and 0. The results suggest that arterial smooth muscle myosin contains 2 nonphosphorylated 20,000-dalton light chain isoforms with different amino acid sequences and that each isoform can be mono- and diphosphorylated.
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DOI：
10.1016/0167-4838(87)90079-3
发表时间：
1987
期刊：
Biochimica et biophysica acta
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Bárány,K;Csabina,S;deLanerolle,P;Bárány,M
通讯作者：
Bárány,M
兔心室肌球蛋白重链的两个分子变体的分离和表征。
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发表时间：
1982
期刊：
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--
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Chizzonite,RA;Everett,AW;Clark,WA;Jakovcic,S;Rabinowitz,M;Zak,R
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Zak,R
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10.1016/s0021-9258(17)42425-2
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1986-01
期刊：
The Journal of biological chemistry
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--
作者：
M. Ikebe;D. Hartshorne;M. Elzinga
通讯作者：
M. Ikebe;D. Hartshorne;M. Elzinga
拉伸诱导的肌球蛋白轻链磷酸化和拉伸释放诱导的动脉平滑肌张力发展。
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1985
期刊：
The Journal of biological chemistry
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--
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Bárány,K;Ledvora,RF;Mougios,V;Bárány,M
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Bárány,M
DOI：
--
发表时间：
1986-05
期刊：
The Journal of biological chemistry
影响因子：
--
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通讯作者：
Anthony Persechini;K. Kamm;J. Stull