Expression and Characterization of Recombinant Murine Factor VIII
Expression and Characterization of Recombinant Murine Factor VIII
复制标题
重组鼠因子 VIII 的表达和表征
DOI：
10.1055/s-0037-1613237
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发表时间：
2002
影响因子：
6.7
通讯作者：
P. Lollar
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
C. Doering;E. Parker;J. Healey;Heather N. Craddock;R. Barrow;P. Lollar
摘要血友病A是一种遗传性出血性疾病，由凝血因子VIII（fVIII）突变引起。本文描述了产生重组鼠FVIII的受调节表达系统的产生。在无血清培养基中，小鼠无B结构域fVIII以4单位/106个细胞/24 h的峰值水平表达。随后，两步纯化程序导致5，300倍富集和70%产率。高度纯化的重组鼠FVIII具有660单位/纳摩尔的比凝血活性。它经历凝血酶的蛋白水解加工，产生活化的异源三聚体，其表现出比活化的人fVIII显著更高的稳定性。利用重组鼠fVIII产生抗fVIII多克隆抗体。静脉注射重组鼠FVIII到血友病A小鼠未能诱导显着的抗FVIII免疫应答，使用的时间表，产生高滴度的抑制性抗体，以人FVIII。这可能为研究对FVIII的免疫耐受提供重要模型。
Summary Hemophilia A is the inherited bleeding disorder that results from mutation of blood coagulation factor VIII (fVIII). Described here is the generation of a regulated expression system producing recombinant murine fVIII. Murine B-domainless fVIII was expressed at a peak level of 4 units/106 cells/24 h in serum-free media. Subsequently, a two-step purification procedure resulted in 5,300-fold enrichment and a 70% yield. Highly purified recombinant murine fVIII had a specific coagulant activity of 660 units per nanomole. It underwent proteolytic processing by thrombin to yield an activated heterotrimer that demonstrated significantly greater stability than activated human fVIII. Recombinant murine fVIII was utilized to generate an anti-fVIII polyclonal antibody. Intravenous injection of recombinant murine fVIII into hemophilia A mice failed to induce a significant anti-fVIII immune response using a schedule that yielded high titer inhibitory antibodies to human fVIII. This may provide an important model for the study of immune tolerance to fVIII.
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凝血因子 VIII 的生物合成、组装和分泌。
DOI：
--
发表时间：
1997
期刊：
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1992
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