Rapid construction of mycobacterial mutagenesis vectors using ligation-independent cloning.
Rapid construction of mycobacterial mutagenesis vectors using ligation-independent cloning.
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DOI：
10.1016/j.mimet.2010.07.014
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发表时间：
2010-10
影响因子：
2.2
通讯作者：
Kendall, Sharon L.
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Balhana, Ricardo;Stoker, Neil G.;Sikder, Mahmudul Hasan;Chauviac, Francois-Xavier;Kendall, Sharon L.
靶向突变是确定给定基因的功能及其参与细菌致病的主要工具之一。在分枝杆菌中，基因缺失通常通过使用等位基因交换技术来完成，该技术通常利用自杀递送载体。我们已经采用了广泛使用的自杀传递载体（p1NIL）的连接非依赖性克隆（LIC）克隆基因的两个侧翼区。生产的pNILRB质粒系列允许更快、更有效和更省力的克隆过程。在本文中，我们描述了制作pNILRB5，p1NIL的修改版本，包含两对LIC位点侧翼的sacB或lacZ基因。我们通过产生3种分枝杆菌突变株证明了这种技术的成功。这些载体将有助于更高通量的诱变方法。
Targeted mutagenesis is one of the major tools for determining the function of a given gene and its involvement in bacterial pathogenesis. In mycobacteria, gene deletion is often accomplished by using allelic exchange techniques that commonly utilise a suicide delivery vector. We have adapted a widely-used suicide delivery vector (p1NIL) for cloning two flanking regions of a gene using ligation independent cloning (LIC). The pNILRB plasmid series produced allow a faster, more efficient and less laborious cloning procedure. In this paper we describe the making of pNILRB5, a modified version of p1NIL that contains two pairs of LIC sites flanking either a sacB or a lacZ gene. We demonstrate the success of this technique by generating 3 mycobacterial mutant strains. These vectors will contribute to more high-throughput methods of mutagenesis.
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DOI：
10.1073/pnas.94.20.10955
发表时间：
1997-09-30
影响因子：
11.1
作者：
Pelicic, V;Jackson, M;Guilhot, C
通讯作者：
Guilhot, C
影响因子：
64.5
作者：
Boshoff, HIM;Reed, MB;Mizrahi, V
通讯作者：
Mizrahi, V
影响因子：
3.2
作者：
Parish, T;Schaeffer, M;Duncan, K
通讯作者：
Duncan, K
影响因子：
3.6
作者：
SANDER, P;MEIER, A;BOTTGER, EC
通讯作者：
BOTTGER, EC
影响因子：
3.2
作者：
Matsoso, LG;Kana, BD;Mizrahi, V
通讯作者：
Mizrahi, V