Thioamide-based fluorescent protease sensors.
Thioamide-based fluorescent protease sensors.
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DOI：
10.1021/ja412297x
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发表时间：
2014-02-05
影响因子：
15
通讯作者：
Petersson EJ
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Goldberg JM;Chen X;Meinhardt N;Greenbaum DC;Petersson EJ
硫胺猝灭剂可以与紧凑的荧光团配对，以设计“开启”荧光蛋白酶底物。我们已经用这种方法研究了各种丝氨酸、半胱氨酸、羧基和金属蛋白酶，包括胰蛋白酶、凝乳胰蛋白酶、胃蛋白酶、热溶酶、木瓜蛋白酶和钙蛋白酶。由于硫胺猝灭了蛋白质中天然存在的一些红移荧光团，因此该技术可用于实时监测几乎任何蛋白酶粗制剂中的蛋白酶活性。我们在三个模型应用中证明了该方法的价值：(1)使用快速混合实验表征木瓜蛋白酶酶动力学，(2)选择性监测具有多个蛋白水解位点的肽中单个位点的裂解，以及(3)分析细胞裂解物中钙蛋白酶抑制剂的特异性。
Thioamide quenchers can be paired with compact fluorophores to design “turn-on” fluorescent protease substrates. We have used this method to study a variety of serine-, cysteine-, carboxyl-, and metallo-proteases, including trypsin, chymotrypsin, pepsin, thermolysin, papain, and calpain. Since thioamides quench some fluorophores red-shifted from those naturally occurring in proteins, this technique can be used for real time monitoring of protease activity in crude preparations of virtually any protease. We demonstrate the value of this method in three model applications: (1) characterization of papain enzyme kinetics using rapid-mixing experiments, (2) selective monitoring of cleavage at a single site in a peptide with multiple proteolytic sites, and (3) analysis of the specificity of an inhibitor of calpain in cell lysates.
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CAMPBELL, P;NASHED, NT
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