Physical heterogeneity of muscle glycogen phosphorylase revealed by hydrostatic pressure dissociation.
Physical heterogeneity of muscle glycogen phosphorylase revealed by hydrostatic pressure dissociation.
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通过静水压力解离揭示肌糖原磷酸化酶的物理异质性。
DOI：
10.1021/bi00075a025
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发表时间：
1993
期刊：
影响因子：
2.9
通讯作者：
Weber,G
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Ruan,K;Weber,G
材料和方法兔肌肉糖原磷酸化酶A（GPA）1来自Boehringer曼海姆（批号108 651）。将酶溶解在标准缓冲液中：0.05 M Tris，pH 7.5，0.001 M EDTA和DTT。通过注射器过滤器除去尺寸大于2 µ的颗粒物质。蛋白质浓度使用在280 nm处12.7 OD单位的比吸光率（对于1 cm深度的1%溶液）通过比色法测定（Graves & Wang，1972）。用Illingworth和科里（1953）的方法测定酶活性。在30 ℃和pH 6.8下，发现比活性为79单位/mg，1单位定义为每分钟从葡萄糖1-磷酸中释放1 µ无机磷酸盐的酶量。AMP、糖原和葡萄糖磷酸盐来自Sigma; 2-（二甲基氨基）萘-5-磺酰氯（DNS-C1）、1-苯胺基萘-8-磺酸盐（ANS）、琥珀酰亚胺芘丁酸盐（SPB）和荧光素5-异硫氰酸酯（FITC）来自Molecular Probes。所有其他试剂均为分析级。蒸馏水通过Millipore系统进一步纯化至阻力为18。
MATERIALS AND METHODSGlycogen phosphorylase A from rabbit muscle (GPA) 1 was from Boehringer Mannheim (Lot 108 651). The enzymes were dissolved in the standard buffer: 0.05 M Tris, pH 7.5, 0.001 M inboth EDTA and DTT. Particulatematter of size greater than 2 µ was removed by a syringe filter. Protein concentration was determined spectrophotometrically using a specific absorptivity at 280 nm of 12.7 OD units for 1-cm depth of 1% solution (Graves & Wang, 1972). Enzyme activity was assayed by the method of Illingworth and Cori (1953). At 30 C and pH 6.8 the specific activity was found to be 79 units/mg, one unit being defined as the amount of enzyme causing the release of 1 µ of inorganic phosphate from glucose 1-phosphate per minute. AMP, glycogen, and glucose phosphate were from Sigma; 2-(dimethylamino) naphthalene-5-sulfonyl chloride (DNS-C1), 1-anilinonaphthalene-8-sulfonate (ANS), succinimidopyrene butyrate (SPB), and fluorescein 5-isothiocyanate (FITC) were from Molecular Probes. All other reagents were of analytical grade. Distilled water was further purified by a Millipore system to a resistance of 18.
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--
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D. Kewley-Port
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--
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J. Hillenbrand