High-throughput detection of miRNAs and gene-specific mRNA at the single-cell level by flow cytometry.
High-throughput detection of miRNAs and gene-specific mRNA at the single-cell level by flow cytometry.
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DOI：
10.1038/ncomms6641
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发表时间：
2014-12-04
影响因子：
16.6
通讯作者：
Kaufmann, Daniel E.
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Porichis, Filippos;Hart, Meghan G.;Griesbeck, Morgane;Everett, Holly L.;Hassan, Muska;Baxter, Amy E.;Lindqvist, Madelene;Miller, Sara M.;Soghoian, Damien Z.;Kavanagh, Daniel G.;Reynolds, Susan;Norris, Brett;Mordecai, Scott K.;Quan Nguyen;Lai, Chunfai;Kaufmann, Daniel E.
荧光原位杂交(FISH)是一种利用荧光探针在单细胞水平上检测特定核酸序列的方法。在这里，我们描述了利用基于分支DNA技术的高灵敏度FISH方法来检测人类白细胞中的mRNA和miRNA的优化方案。这项技术可以被多重使用，并与荧光抗体蛋白染色相结合，以解决不同细胞群体中的各种问题。我们展示了抗原特异性的干扰素γ和IL-2mRNAs在艾滋病毒和巨细胞病毒特异性T细胞中的上调。我们展示了在单个细胞中同时检测到细胞因子mRNA和相应的蛋白。我们应用这种方法来检测针对相应蛋白质的流动抗体很差或不可用的mRNAs。我们使用这项技术来显示对T细胞功能至关重要的microRNA miR-155的调制。我们将此方法应用于图像流技术同时检测mRNA和蛋白质。
Fluorescent in situ hybridization (FISH) is a method that uses fluorescent probes to detect specific nucleic acid sequences at the single cell level. Here we describe optimized protocols that exploit a highly sensitive FISH method based on branched DNA technology to detect mRNA and miRNA in human leukocytes. This technique can be multiplexed and combined with fluorescent antibody protein staining to addressa variety of questions in heterogeneous cell populations. We demonstrate antigen-specific upregulation of IFNγ and IL-2 mRNAs in HIV- and CMV-specific T cells. We show simultaneous detection of cytokine mRNA and corresponding protein in single cells. We apply this method to detect mRNAs for which flow antibodies against the corresponding proteins are poor or are not available. We use this technique to show modulation of a microRNA critical for T cell function, miR-155. We adapt this assay for simultaneous detection of mRNA and proteins by Image Stream technology.
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影响因子：
3.7
作者：
Hanley, Mary Beth;Lomas, Woodrow;Park, Emily
通讯作者：
Park, Emily
影响因子：
17.3
作者：
Wang, Daojing;Bodovitz, Steven
通讯作者：
Bodovitz, Steven
DOI：
10.1038/nri3494
发表时间：
2013-09
期刊：
Nature reviews. Immunology
影响因子：
--
作者：
通讯作者：
--
影响因子：
14.8
作者：
通讯作者：
--
影响因子：
14.8
作者：
Namekawa, Satoshi H.;Lee, Jeannie T.
通讯作者：
Lee, Jeannie T.