Functional reconstitution of the mitochondrial Ca2+/H+ antiporter Letm1.
Functional reconstitution of the mitochondrial Ca2+/H+ antiporter Letm1.
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DOI：
10.1085/jgp.201311096
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发表时间：
2014-01
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
Miller C
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Tsai MF;Jiang D;Zhao L;Clapham D;Miller C
亮氨酸拉链，EF手含跨膜蛋白1 （Letm1）基因编码线粒体内膜蛋白，其缺失严重扰乱线粒体Ca2+和K+稳态。我们在脂质体中表达、纯化和重组了人Letm1蛋白。利用Ca2+荧光团和基于45Ca2+的测定，我们直接证明了Letm1是Ca2+转运体，具有Ca2+≈Mn2+ > Gd3+≈La3+ > Sr2+ >> Ba2+, Mg2+, K+， Na+的阳离子亲和性。动力学分析得出Letm1周转率为2 Ca2+/s， Km为~ 25µM。进一步的实验表明，Letm1介导电中性的1 Ca2+/2 H+反端口。Letm1对线粒体钙单转运抑制剂钌红和线粒体Na+/Ca2+交换抑制剂CGP-37157不敏感。这里描述的Letm1的功能特性与完整线粒体中发现的H+依赖的Ca2+运输机制非常相似。
The leucine zipper, EF hand–containing transmembrane protein 1 (Letm1) gene encodes a mitochondrial inner membrane protein, whose depletion severely perturbs mitochondrial Ca2+ and K+ homeostasis. Here we expressed, purified, and reconstituted human Letm1 protein in liposomes. Using Ca2+ fluorophore and 45Ca2+-based assays, we demonstrate directly that Letm1 is a Ca2+ transporter, with apparent affinities of cations in the sequence of Ca2+ ≈ Mn2+ > Gd3+ ≈ La3+ > Sr2+ >> Ba2+, Mg2+, K+, Na+. Kinetic analysis yields a Letm1 turnover rate of 2 Ca2+/s and a Km of ∼25 µM. Further experiments show that Letm1 mediates electroneutral 1 Ca2+/2 H+ antiport. Letm1 is insensitive to ruthenium red, an inhibitor of the mitochondrial calcium uniporter, and CGP-37157, an inhibitor of the mitochondrial Na+/Ca2+ exchanger. Functional properties of Letm1 described here are remarkably similar to those of the H+-dependent Ca2+ transport mechanism identified in intact mitochondria.
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影响因子：
4.8
作者：
Nowikovsky, K;Froschauer, EM;Schweyen, RJ
通讯作者：
Schweyen, RJ
影响因子：
3.8
作者：
Walden, Michael;Accardi, Alessio;Wu, Fang;Xu, Chen;Williams, Carole;Miller, Christopher
通讯作者：
Miller, Christopher
DOI：
10.1074/jbc.m112.392084
发表时间：
2012-10-05
期刊：
The Journal of biological chemistry
影响因子：
--
作者：
Alam MR;Groschner LN;Parichatikanond W;Kuo L;Bondarenko AI;Rost R;Waldeck-Weiermair M;Malli R;Graier WF
通讯作者：
Graier WF
影响因子：
4.5
作者：
Lupo, Domenico;Vollmer, Christine;Rehling, Peter
通讯作者：
Rehling, Peter
影响因子：
4.4
作者：
Schlickum, S;Moghekar, A;Endele, SU
通讯作者：
Endele, SU