In vivo labeling of endogenous genomic loci in C. elegans using CRISPR/dCas9.
In vivo labeling of endogenous genomic loci in C. elegans using CRISPR/dCas9.
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DOI：
10.17912/micropub.biology.000701
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发表时间：
2022
影响因子：
--
通讯作者：
Conradt, Barbara
中科院分区：
文献类型：
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作者：
Memar, Nadin;Sethi, Aditya;Luehr, Sebastian;Lambie, Eric J;Conradt, Barbara
据报道，在哺乳动物组织培养细胞中，使用基于CRISPR/Cas9的系统，利用EGFP标记的核酸内切酶缺陷Cas9蛋白（dCas9::EGFP），可视化具有开放染色质状态的基因组位点（Chen et al. 2013）。在这里，我们将这种方法应用于秀丽隐杆线虫。我们生成了一株秀丽隐杆线虫，该菌株以诱导方式表达dCas9蛋白融合到两个核定位的EGFP分子（dCas9::NLS::2xEGFP::NLS）。利用该菌株，我们报道了两个内源性重复位点rnn -4和rnn -1在秀丽隐杆线虫活胚中的可视化，其中5S和18S核糖体rna是由它们组成的。
Visualization of genomic loci with open chromatin state has been reported in mammalian tissue culture cells using a CRISPR/Cas9-based system that utilizes an EGFP-tagged endonuclease-deficient Cas9 protein (dCas9::EGFP) (Chen et al. 2013). Here, we adapted this approach for use in Caenorhabditis elegans . We generated a C. elegans strain that expresses the dCas9 protein fused to two nuclear-localized EGFP molecules (dCas9::NLS::2xEGFP::NLS) in an inducible manner. Using this strain, we report the visualization in live C. elegans embryos of two endogenous repetitive loci, rrn-4 and rrn-1 , from which 5S and 18S ribosomal RNAs are constitutively generated.