Plasma FIB milling for the determination of structures in situ.
Plasma FIB milling for the determination of structures in situ.
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DOI：
10.1038/s41467-023-36372-9
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发表时间：
2023-02-06
影响因子：
16.6
通讯作者：
Grange, Michael
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Berger, Casper;Dumoux, Maud;Glen, Thomas;Yee, Neville B. -y.;Mitchels, John M.;Patakova, Zuzana;Darrow, Michele C.;Naismith, James H.;Grange, Michael
细胞和组织内的结构生物学研究需要将玻璃化标本变薄至电子透明的方法。到目前为止，已经使用了基于镓的聚焦离子束。然而，离子注入、表面化学的变化以及无法获得高电流限制了镓的应用。在这里，我们表明，等离子体耦合的离子源可以产生低温lamenium玻璃化的人类细胞在一个强大的和自动化的方式，质量足以伪原子结构的测定。在配备长低温运行时间（> 1周）的原型显微镜中生产Lamplets，并具有与现代透射电子显微镜完全兼容的多样品支持。我们证明，等离子体离子源可用于细胞内的结构生物学，确定原位结构到4.9 μ m，并将分辨率依赖于从薄片边缘的颗粒距离。我们描述了一个工作流程，不同的等离子体可以检查，以进一步简化薄片制造。作者利用等离子体聚焦离子束进行伪原子结构测定，报告了原位结构生物学中增加的通量和自动化，以阐明细胞和组织内的结构-功能关系。
Structural biology studies inside cells and tissues require methods to thin vitrified specimens to electron transparency. Until now, focused ion beams based on gallium have been used. However, ion implantation, changes to surface chemistry and an inability to access high currents limit gallium application. Here, we show that plasma-coupled ion sources can produce cryogenic lamellae of vitrified human cells in a robust and automated manner, with quality sufficient for pseudo-atomic structure determination. Lamellae were produced in a prototype microscope equipped for long cryogenic run times (> 1 week) and with multi-specimen support fully compatible with modern-day transmission electron microscopes. We demonstrate that plasma ion sources can be used for structural biology within cells, determining a structure in situ to 4.9 Å, and characterise the resolution dependence on particle distance from the lamella edge. We describe a workflow upon which different plasmas can be examined to further streamline lamella fabrication. The authors harness plasma focused ion beams for pseudo-atomic structure determination, reporting increased throughput and automation in in situ structural biology to elucidate structure-function relationships inside cells and tissues.
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影响因子：
7.7
作者：
Klumpe S;Fung HK;Goetz SK;Zagoriy I;Hampoelz B;Zhang X;Erdmann PS;Baumbach J;Müller CW;Beck M;Plitzko JM;Mahamid J
通讯作者：
Mahamid J
DOI：
10.1111/tra.12002
发表时间：
2012-12
期刊：
Traffic (Copenhagen, Denmark)
影响因子：
--
作者：
Dumoux M;Clare DK;Saibil HR;Hayward RD
通讯作者：
Hayward RD
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影响因子：
4.6
作者：
Liu, Juan;Wu, Shaoxian;Jiang, Jingting
通讯作者：
Jiang, Jingting
DOI：
10.1007/s00339-002-1943-1
发表时间：
2003-05-01
影响因子：
2.7
作者：
Frey, L;Lehrer, C;Ryssel, H
通讯作者：
Ryssel, H
影响因子：
2.2
作者：
Burnett, T. L.;Kelley, R.;Withers, P. J.
通讯作者：
Withers, P. J.