基于肺微血管内皮细胞而非肺上皮细胞途径阻断 PD—L1表达可以减轻小鼠的间接急性肺损伤
基于肺微血管内皮细胞而非肺上皮细胞途径阻断 PD—L1表达可以减轻小鼠的间接急性肺损伤
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DOI：
10.3760/cma.j.issn.2095-4352.2019.01.009
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发表时间：
2019
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
许淑敏
中科院分区：
文献类型：
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作者：
孙冰珂;李秀华;郑贵珍;董天操;李玉生;李红强;燕艳丽;白建文;许淑敏
【摘要】目的探讨程序性死亡配体一1(PD—L1)在肺微血管内皮细胞或肺上皮细胞的表达及其在小鼠间.接急性肺损伤(i—Au)模型中的作用及机制。方法将80只雄性c57BI拍小鼠随机分为两部分(均凡=40)，.分别观察不同给药途径对PD—L1表达的影响。每部分小鼠按照随机数字表法分为假手术(sham)组、i—ALI组、.i—ALI+小干扰RNA(siRNA)随机序列对照组及i—ALI+含可特异性抑制PD—L1表达碱基对的siRNA(PD—L1.siRNA)组，每组10只。采用失血性休克联合盲肠结扎穿孔术(cLP)“二次打击”诱导i—ALI模型；sham组.仅结扎双侧股动脉，不予置管及放血，且仅分离盲肠但不结扎穿孔。i—ALI+PD—L1 siRNA组于小鼠休克复.苏2 h后分别经尾静脉或气道内给予PD—Ll siRNA阻断肺微血管内皮细胞或肺上皮细胞PD—L1的表达；.i-ALI+siRNA随机序列对照组给予无抑制PD—L1表达效应的siRNA随机序列；sham组和i—ALI组给予100汕.磷酸盐缓冲液(PBs)。cLP术后24 h处死小鼠，收集外周血、肺组织及支气管肺泡灌洗液(BALF)，用流式细.胞仪检测PD—L1蛋白表达，用酶联免疫吸附试验(ELIsA)检测外周血、肺组织以及BALF中的细胞因子和.趋化因子水平，定量检测血浆和BALF中蛋白浓度及肺组织中髓过氧化物酶(MPO)活性，光镜下观察肺组.织病理学改变。结果①与sham组相比，i—ALI组肺微血管内皮细胞或肺上皮细胞PD—L1的表达均明显.升高[肺内皮细胞：(27．88±1．53)％比(19．64±1．03)％，肺上皮细胞：(58．70±8．21)％比(29．23±3．94)％，.均P<0．05]。②经尾静脉给予PD—L1 siRNA可以抑制肺微血管内皮细胞PD—L1的表达[与i—ALI组比较：.(21．37±0．76)％比(27．88±1．53)％，P<0．05]；经气道内给予PD—L1 siRNA主要抑制肺上皮细胞PD—L1的表.达[与i—ALI组比较：(31．23±4．71)％比(58．70±8．21)％，P<0．05]。给予siRNA随机序列对i—ALI小鼠肺.微血管内皮细胞或肺上皮细胞PD—L1的表达均无影响。③经尾静脉给予PD—L1 siRNA抑制肺微血管内皮细.胞PD—L1的表达后，BALF，血浆的蛋白比值较i—ALI组显著降低[(4．48±0．35)×10-3比(6．11±0．56)×10～，.P<0．05]；肺组织MP0活性亦较i—ALI组显著降低(u·¨g_1·“n～：2．48±0．47比4．56±O．52，P<0．05)；肺组织.或血浆中自细胞介素一6(IL一6)、单核细胞趋化蛋白一l(McP一1)、巨噬细胞炎症蛋白一2(MIP一2)、肿瘤坏死因子一仪.(TNF—d)等炎性因子水平较i—ALI组显著降低[肺组织(n如)：IL一6为177-4±23．2比287．9±57．3，McP—l为.839．6±91．7比1 395．7±211．9，MIP一2为923．7±107．3比1 700．9±240．2；血浆(ng，L)：IL一6为950．2±192．7比.1 828．2±243．6，TNF一仪为258．7±29．1比443．0±58．1，MCP一1为2 583．8±302．3比4 328．1±416．4，MIP一2为.1 512．9±165．6比2 005．9±85．7，均P<0．05]，但BALF中炎性因子水平均无明显变化。病理学观察显示，经尾.静脉给予PD—L1 siRNA抑制肺微血管内皮细胞PD—L1表达后，间质和肺泡水肿明显减轻，炎性细胞浸润减少；.而经气道内给予PD—L1 siRNA抑制肺上皮细胞PD—L1表达后，BALF／血浆的蛋白比值、MP0活性以及肺组织、.外周血、BALF中炎性因子表达和肺组织病理学表现均无显著变化。结论抑制肺微血管内皮细胞而非肺上皮.细胞PD—LI的表达能减轻失血性休克一脓毒症诱导的i—ALI。