Geometry and expression enhance enrichment of functional yeast-displayed ligands via cell panning.
Geometry and expression enhance enrichment of functional yeast-displayed ligands via cell panning.
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DOI：
10.1002/bit.26001
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发表时间：
2016-11
影响因子：
3.8
通讯作者：
Hackel, Benjamin J.
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Stern, Lawrence A.;Schrack, Ian A.;Johnson, Sadie M.;Deshpande, Aakash;Bennett, Nathaniel R.;Harasymiw, Lauren A.;Gardner, Melissa K.;Hackel, Benjamin J.
酵母表面展示已被证明是发现和进化具有新的或改进的结合活性的配体的有效工具。结合活性的选择通常使用靶分子的固定化或荧光标记的可溶性结构域（例如重组胞外域片段）来进行。虽然这种方法通常提供对可溶性分子靶标具有高亲和力和特异性的配体，但转化为结合真正的膜结合细胞靶标通常是有问题的。针对哺乳动物细胞表面的直接选择可以单独进行，也可以与基于可溶性靶点的选择结合进行，以进一步针对真正细胞靶点的配体。本研究使用一系列纤连蛋白结构域、亲和体和 Gp2 配体以及表达一系列靶标、表皮生长因子受体和癌胚抗原的人类细胞系，定量鉴定了决定配体富集和产量的元素。最值得注意的是，配体和酵母之间的扩展柔性接头将高靶表达细胞上的低亲和力（> 600 nM）结合物的富集比从1.4±0.8提高到62±57，将中价细胞上的高亲和力结合物（2 nM）的富集比从14±13提高到74±25。将酵母展示融合从 C 端展示反转为 N 端展示仍然能够实现富集，尽管效率降低了 40% 至 97%。总的来说，这项研究进一步阐明了通过淘选哺乳动物细胞成功富集酵母展示的结合配体的条件，同时强调了新方法。
Yeast surface display has proven to be an effective tool in the discovery and evolution of ligands with new or improved binding activity. Selections for binding activity are generally carried out using immobilized or fluorescently labeled soluble domains of target molecules such as recombinant ectodomain fragments. While this method typically provides ligands with high affinity and specificity for the soluble molecular target, translation to binding true membrane-bound cellular target is commonly problematic. Direct selections against mammalian cell surfaces can be carried out either exclusively or in combination with soluble target-based selections to further direct towards ligands for genuine cellular target. Using a series of fibronectin domain, affibody, and Gp2 ligands and human cell lines expressing a range of their targets, epidermal growth factor receptor and carcinoembryonic antigen, this study quantitatively identifies the elements that dictate ligand enrichment and yield. Most notably, extended flexible linkers between ligand and yeast enhances enrichment ratios from 1.4±0.8 to 62±57 for a low-affinity (>600 nM) binder on cells with high target expression and from 14±13 to 74±25 for a high-affinity binder (2 nM) on cells with medium valency. Inversion of the yeast display fusion from C-terminal display to N-terminal display still enables enrichment albeit with 40% to 97% reduced efficacy. Collectively, this study further enlightens the conditions – while highlighting new approaches – that yield successful enrichment of yeast-displayed binding ligands via panning on mammalian cells.
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影响因子：
2.4
作者：
Cho, Yong Ku;Shusta, Eric V.
通讯作者：
Shusta, Eric V.
DOI：
10.1073/pnas.0914358107
发表时间：
2010-04-06
影响因子：
11.1
作者：
Hu, Xuebo;Kang, Sungkwon;Jin, Moonsoo M.
通讯作者：
Jin, Moonsoo M.
影响因子：
5.6
作者：
Hackel, Benjamin J.;Kapila, Atul;Wittrup, K. Dane
通讯作者：
Wittrup, K. Dane
影响因子：
19.7
作者：
Hackel, Benjamin J.;Kimura, Richard H.;Gambhir, Sanjiv S.
通讯作者：
Gambhir, Sanjiv S.
DOI：
10.1038/mtna.2012.59
发表时间：
2013-01-08
期刊：
Molecular therapy. Nucleic acids
影响因子：
--
作者：
通讯作者：
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