DENV-2感染的HUVECs与巨噬细胞相互作用对主要炎性细胞因子产生的影响
DENV-2感染的HUVECs与巨噬细胞相互作用对主要炎性细胞因子产生的影响
复制标题
DOI：
10.3760/cma.j.issn.0254-5101.2019.06.005
复制
发表时间：
2019
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
周恩正
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
来涛;左丽;罗玉;毛佳璇;陈俊豪;周恩正
目的观察原代人脐静脉内皮细胞(primary human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)被登革热2型病毒(dengue virus 2,DENV-2)感染后,与人外周血巨噬细胞(macrophages,Mo)共培养,两种细胞主要炎性因子产生的变化。方法密度梯度离心法从人体外周血浓缩白细胞中分离单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell, PBMC),贴壁得到单核细胞,通过巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)刺激,流式细胞术检测CD14+CD11b+细胞纯度,得到Mo。DENV-2感染HUVECs,real-time PCR检测HUVECs细胞内病毒NS1 mRNA表达量变化。HUVECs被DENV-2感染后,通过Transwell法与Mo共培养,对照组用鞘氨醇-1-磷酸(sphingosine-1-phosphate, S1P)1型特异性受体激动剂CYM-5442预处理24 h去除药物后感染病毒。Real-time PCR分别检测HUVECs产生的IL-6、IL-8 mRNA和Mo产生的IL-6、 IL8、TNF-α、IL-1 β mRNA的逆转录水平;ELISA双抗体夹心法检测培养上清中上述细胞因子的表达。结果HUVECs DENV-2被感染后,细胞内NS1基因转录水平逐渐上升, 24 h时达峰值(2.66±0.53,P<0.05)后下降。流式细胞术检测Mo纯度为(89. 16±2.07)%.HUVECs被DENV-2感染后IL-6、IL-8 mRNA转录水平均上调,24h mRNA转录量达到峰值;IL-6为16. 10± 0.17,IL-8为29.76±0.58。未感染组转录水平 IL-6为1. 46±0. 67,IL-8为1.60±0.54。Mo被感染后IL-6 IL-8 TNF-α 、IL-1 β mRNA表达量均有明显上升,在24 h mRNA IL-6表达量为45. 82±3. 72,IL-8为52.34±1.69(12 h),TNF-α为28.94±1.75,IL-1β为30.96±1.44;未感染组转录水平 IL-6为1.16± 0.22,IL-8为1. 15±0.21,TNF-α为1. 11±0.09,IL-1β为1.47±0.31。HUVECs与Mo共培养后上述细胞因子在各时间点的转录水平有所下降,依然明显高于未感染对照组。CYM-5442预处理后,共培养组感染的HUVECs IL-6 IL-8的mRNA转录水平明显下降(P<0. 01),Mo中IL-6、IL-8、TNF-α、IL-1 β mRNA转录水平也有下调(P<0. 01)。结论 DENV-2能够感染原代HUVECs,且被DENV-2感染的HUVECs能够活化Mo并促使其分泌大量的IL-6、IL-8、TNF-α、IL-1β,同时活化的Mo能一定程度地降低HUVECs炎症细胞因子的产生。