Microscale synthesis and kinetic isotope effect analysis of (4R)-[Ad-(14)C, 4-(2)H] NADPH and (4R)-[Ad-(3)H,4-(2)H] NADPH.
Microscale synthesis and kinetic isotope effect analysis of (4R)-[Ad-(14)C, 4-(2)H] NADPH and (4R)-[Ad-(3)H,4-(2)H] NADPH.
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DOI：
10.1002/jlcr.1660
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发表时间：
2009-09-15
影响因子：
1.8
通讯作者：
Kohen, Amnon
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Yahashiri, Atsushi;Sen, Arundhuti;Kohen, Amnon
关键词：
我们提出了一种 NADPH 的一锅化学酶微尺度合成方法，具有两种不同同位素标记模式：(4R)-[Ad-14C,4-2H] NADPH 和 (4R)-[Ad-3H,4-2H] NADPH。这些辅因子是多种酶所必需的，因此同位素标记的烟酰胺引起了研究人员的极大兴趣。在当前程序中，[Ad-14C] NAD+ 和 [Ad-3H] NAD+ 被 NAD+ 激酶磷酸化，分别产生 [Ad-14C] NADP+ 和 [Ad-3H] NADP+。然后使用热厌氧布氏醇脱氢酶将氘从异丙醇的C2立体定向地转移至NADP+的C4的表面。经HPLC纯化后，NMR分析表明4R位氘含量大于99.7%。然后使用标记的辅因子成功、灵敏地测量 R67 二氢叶酸还原酶的动力学同位素效应，为该合成方法的实用性提供了有力的证据。
We present a one-pot chemo-enzymatic microscale synthesis of NADPH with two different patterns of isotopic labels: (4R)-[Ad-14C,4-2H] NADPH and (4R)-[Ad-3H,4-2H] NADPH. These co-factors are required by an enormous range of enzymes, and isotopically labeled nicotinamides are consequently of significant interest to researchers. In the current procedure, [Ad-14C] NAD+ and [Ad-3H] NAD+ were phosphorylated by NAD+ kinase to produce [Ad-14C] NADP+ and [Ad-3H] NADP+, respectively. Thermoanaerobium brockii alcohol dehydrogenase was then used to stereospecifically transfer deuterium from C2 of isopropanol to the re face of C4 of NADP+. After purification by HPLC, NMR analysis indicated the deuterium content at the 4R position is more than 99.7 %. The labeled cofactors were then used to successfully and sensitively measure kinetic isotope effects for R67 dihydrofolate reductase, providing strong evidence for the utility of this synthetic methodology.
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影响因子：
1.8
作者：
Markham, Kelli A.;Kohen, Amnon
通讯作者：
Kohen, Amnon
影响因子：
2.9
作者：
McCracken, JA;Wang, T;Kohen, A
通讯作者：
Kohen, A
DOI：
10.1073/pnas.0606976103
发表时间：
2006-10-24
影响因子：
11.1
作者：
Wang, Lin;Goodey, Nina M.;Kohen, Amnon
通讯作者：
Kohen, Amnon
影响因子：
2.9
作者：
Yahashiri, Atsushi;Howell, Elizabeth E.;Kohen, Amnon
通讯作者：
Kohen, Amnon
DOI：
10.1098/rstb.2006.1871
发表时间：
2006-08-29
影响因子：
6.3
作者：
Wang, Lin;Goodey, Nina M.;Kohen, Amnon
通讯作者：
Kohen, Amnon