河弧菌中群体感应系统相关基因及信号分子检测
河弧菌中群体感应系统相关基因及信号分子检测
[目的]了解河弧菌在30℃及37℃条件下群体感应信号分子CAI-1、AI-2及AHLs的动态变化水平和群体感应系统相关基因在不同来源河弧菌菌株中的分布及信号分子产生情况,为进一步认识群体感应系统对河弧菌致病性及环境生存适应性的作用打下基础。[方法]制备待测菌株的无菌培养上清液,分别用群体感应信号分子CAI-1、AI-2及AHLs特异性检测菌株MM920、BB170及JAZ1检测上清中相应的信号分子。PCR检测不同来源河弧菌中群体感应系统组成基因的存在情况。通过测定偶氮酪蛋白的方法检测HapA蛋白酶活性。[结果]在30℃及37℃的培养条件下,河弧菌参考菌株VF85003菌液上清中 CAI-1、AI-2和AHLs信号分子水平均随菌体密度的增加而升高。相同菌体密度时37℃培养上清液中的CAI-1和A-2水平高于30℃,但AHLs水平整体低于30℃。对70株不同来源的河弧菌菌株进行PCR检测发现其中45株河弧菌含有全部群体感应系统组成的相关基因,这些菌株上清中的CAI-1、AI-2和AHLs信号分子水平大致分布在100-1000倍的范围内,并非所有菌株都具有全部三种信号分子。45株河弧菌中有48.89%的菌株HapA蛋白酶活性检测为阳性,51.11%的菌株检测结果为阴性。[结论] VF85003培养上清液中CAI-1、AI-2和AHLs信号分子水平呈密度依赖性升高,AHL信号分子的表达水平在温暖的环境(30℃)温度下较宿主温度(37℃)下更高,而CAI-1/AI-2信号分子则相反,在宿主温度(37℃)条件表达更高,提示其在河弧菌致病性和环境适应性生存方面的不同作用。群体感应系统组成基因的分布、三种信号分子表达水平和毒力因子金属蛋白酶HapA活性存在菌株间差异。