Cell-selective labeling using amino acid precursors for proteomic studies of multicellular environments.
Cell-selective labeling using amino acid precursors for proteomic studies of multicellular environments.
复制标题
DOI：
10.1038/nmeth.2529
复制
发表时间：
2013-08
期刊：
影响因子：
48
通讯作者：
Millerephrin, Martin L.
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Gauthier, Nicholas P.;Soufi, Boumediene;Walkowicz, William E.;Pedicord, Virginia A.;Mavrakis, Konstantinos J.;Macek, Boris;Gin, David Y.;Sander, Chris;Millerephrin, Martin L.
为了解决目前高通量方法用于研究细胞间通讯和确定多细胞环境中蛋白质的细胞来源的局限性，我们开发了一种选择性地和连续地标记共培养中单个细胞类型的蛋白质组的技术。通过外源氨基酸生物合成酶的转基因表达，脊椎动物细胞克服了它们对必需氨基酸的依赖，并且可以通过代谢掺入由重同位素标记的前体产生的氨基酸来选择性地标记脊椎动物细胞。我们将这种方法命名为氨基酸前体类型特异性标记（CTAP）。在几种人类和小鼠细胞系中测试CTAP，我们能够在共培养中差异标记不同细胞群体的蛋白质组，并通过定量质谱法确定蛋白质的相对表达。此外，CTAP成功地鉴定了共培养物中细胞外蛋白质的来源细胞，突出了其在生物标志物发现中的潜在用途，用于将分泌因子与其细胞来源联系起来。
To address limitations of current high-throughput methods for studying cell-cell communication and determining the cell-of-origin of proteins in multicellular environments, we have developed a technique that selectively and continuously labels the proteome of individual cell types in co-culture. Through transgenic expression of exogenous amino acid biosynthesis enzymes, vertebrate cells overcome their dependence on essential amino acids and can be selectively labeled through metabolic incorporation of amino acids produced from heavy isotope-labeled precursors. We have named this method Type specific labeling with Amino acid Precursors (CTAP). Testing CTAP in several human and mouse cell lines, we were able to differentially label the proteome of distinct cell populations in co-culture and determine the relative expression of proteins by quantitative mass spectrometry. In addition, CTAP successfully identified the cell-of-origin of extracellular proteins in co-culture, highlighting its potential use in biomarker discovery for linking secreted factors to their cellular source.
登录
查看更多内容
影响因子：
14.8
作者：
Ong, Shao-En;Mann, Matthias
通讯作者：
Mann, Matthias
影响因子：
4.4
作者：
Cox, Juergen;Neuhauser, Nadin;Mann, Matthias
通讯作者：
Mann, Matthias
影响因子：
7
作者：
Ross, PL;Huang, YLN;Pappin, DJ
通讯作者：
Pappin, DJ
影响因子：
48
作者：
Rechavi, Oded;Kalman, Matan;Goldstein, Itamar
通讯作者：
Goldstein, Itamar
DOI：
10.1016/0167-4781(94)90064-7
发表时间：
1994-10-18
期刊：
BIOCHIMICA ET BIOPHYSICA ACTA-GENE STRUCTURE AND EXPRESSION
影响因子：
--
作者：
SAQIB, KM;HAY, SM;REES, WD
通讯作者：
REES, WD