Expression of the Human 5-Hydroxytryptamine1A Receptor in Sf9 Cells
Expression of the Human 5-Hydroxytryptamine1A Receptor in Sf9 Cells
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人 5-羟色胺 1A 受体在 Sf9 细胞中的表达
DOI：
--
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发表时间：
1995
影响因子：
4.8
通讯作者：
D. Manning
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
P. Butkerait;Y. Zheng;H. Hallak;T. Graham;Heather A. Miller;K. Burris;P. Molinoff;D. Manning
探讨了草地贪夜蛾 (Sf9) 细胞可以为人类 5-羟色胺 1A (5-HT1A) 受体与哺乳动物 G 蛋白亚基的重建提供完整细胞环境的可能性。发现 5-HT1A 受体在 Sf9 细胞中以相对较高的水平（5-34 pmol 受体/mg 膜蛋白）单独表达时呈现非偶联表型，即与受体的激动剂结合的特征是相对较高的 Kd 和对 GTP 不敏感。受体与αi“家族”成员以及β1和γ亚基的各种组合的共表达增加了对激动剂的亲和力，高于在哺乳动物细胞中观察到的受体偶联形式的亲和力，同时赋予鸟苷5'-(β,γ-亚氨基)三磷酸敏感性。使用的激动剂是[3H]8-羟基-N,N-二丙基-2-氨基四氢化萘([3H]8-OH-DPAT)和[125I]R(+)-反式-8-羟基-2-[N-正丙基-N-(3'-碘-2'-丙烯基)氨基]四氢化萘([125I]8-OH-PIPAT)。拮抗剂 [125I]4-(2'-甲氧基苯基)-1-[2'-[N-(2''-吡啶基)-对碘苯甲酰胺]乙基]哌嗪 ([125I]p-MPPI) 的结合不受 G 蛋白亚基共表达的影响。 α 和 βγ 亚基都是最佳耦合所必需的。在这方面，当用 β1γ2 表达时，αi1、αi2、αi3、αo 和 αz 之间没有明显差异，当用 αi1 表达时，β1γ 亚基的大多数排列之间也没有明显差异（β1γ2 ≈ β1γ3 ≈ β1γ5 > β1γ1）。用β1γ2表达的αs和αq不参与偶联。这些数据支持这样的结论：哺乳动物受体和选定的 G 蛋白阵列之间可以在完整的 Sf9 细胞中建立正常相互作用，并扩展了先前对 5-HT1A 受体与 Go 和百日咳毒素不敏感 G 蛋白 Gz 偶联的观察结果。
The possibility that Spodoptera frugiperda (Sf9) cells can provide an intact cell setting for reconstitution of the human 5-hydroxytryptamine1A (5-HT1A) receptor with mammalian G protein subunits was explored. The 5-HT1A receptor was found to assume an uncoupled phenotype when expressed alone in Sf9 cells at relatively high levels (5-34 pmol of receptor/mg of membrane protein), i.e. agonist-binding to the receptor was characterized by a relatively high Kd and an insensitivity to GTP. Co-expression of the receptor with members of the αi “family” together with various combinations of β1 and γ subunits increased the affinity for agonists to that observed for the coupled form of receptor in mammalian cells, concomitant with conferrance of guanosine 5′-(β,γ-imino)triphosphate sensitivity. The agonists employed were [3H]8-hydroxy-N, N-dipropyl-2-aminotetralin ([3H] 8-OH-DPAT) and [125I]R(+)-trans-8-hydroxy-2-[N-n-propyl-N-(3′-iodo-2′-propenyl)amino]tetralin ([125I]8-OH-PIPAT). The binding of an antagonist, [125I]4-(2′-methoxyphenyl)-1-[2′-[N-(2″-pyridinyl)-p-iodobenzamido]ethyl] piperazine ([125I]p-MPPI), was unaffected by co-expression of G protein subunits. Both α and βγ subunits were required for optimal coupling. No differences were evident among αi1, αi2, αi3, αo, and αz when expressed with β1γ2 in this regard, nor among most permutations of β1γ subunits when expressed with αi1 (β1γ2 ≈ β1γ3 ≈ β1γ5 > β1γ1). αs and αq expressed with β1γ2 did not participate in coupling. These data support the conclusion that normal interactions between a mammalian receptor and a select array of G proteins can be established in intact Sf9 cells, and extend previous observations of 5-HT1A receptor coupling to Go and the pertussis toxin-insensitive G protein Gz.
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与视紫红质的特异性相互作用取决于 G 蛋白中的 γ 亚基类型。
DOI：
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发表时间：
1993
期刊：
The Journal of biological chemistry
影响因子：
--
作者：
Kisselev,O;Gautam,N
通讯作者：
Gautam,N
DOI：
--
发表时间：
1993-07
期刊：
The Journal of biological chemistry
影响因子：
--
作者：
J. Hepler;T. Kozasa;A. Smrcka;Melvin I. Simon;S. Rhee;P. Sternweis;A. Gilman
通讯作者：
J. Hepler;T. Kozasa;A. Smrcka;Melvin I. Simon;S. Rhee;P. Sternweis;A. Gilman
G 蛋白 γ 亚基的选择性组织分布，包括通过 cDNA 克隆鉴定的新形式的 γ 亚基。
DOI：
--
发表时间：
1992
期刊：
The Journal of biological chemistry
影响因子：
--
作者：
Cali,JJ;Balcueva,EA;Rybalkin,I;Robishaw,JD
通讯作者：
Robishaw,JD
与直接由 [3H]-8-羟基-2-(二正丙氨基)四氢萘 ([3H]-8-OH-DPAT) 标记的 5-HT1A 结合位点的核苷酸相互作用。
影响因子：
5.8
作者：
Schlegel,JR;Peroutka,SJ
通讯作者：
Peroutka,SJ
从杆状病毒感染的昆虫细胞中纯化出具有重组活性的 G 蛋白偶联受体。
DOI：
--
发表时间：
1991
期刊：
The Journal of biological chemistry
影响因子：
--
作者：
Parker,EM;Kameyama,K;Higashijima,T;Ross,EM
通讯作者：
Ross,EM