Specificity Studies of the Venezuelan Equine Encephalitis Virus Non-Structural Protein 2 Protease Using Recombinant Fluorescent Substrates.
Specificity Studies of the Venezuelan Equine Encephalitis Virus Non-Structural Protein 2 Protease Using Recombinant Fluorescent Substrates.
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DOI：
10.3390/ijms21207686
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发表时间：
2020-10-16
影响因子：
5.6
通讯作者：
Tőzsér J
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Bozóki B;Mótyán JA;Hoffka G;Waugh DS;Tőzsér J
甲病毒委内瑞拉马脑炎病毒（VEEV）的非结构蛋白2（nsP 2）是一种半胱氨酸蛋白酶，负责处理病毒非结构多聚蛋白，由于VEEV的临床相关性，因此是重要的药物靶标。在这项研究中，我们设计了两个重组VEEV nsP 2构建体，研究N-末端延伸对蛋白酶活性的影响，并在体外研究延长酶的特异性。发现N-末端延伸对蛋白酶活性没有实质性影响。使用His 6-MBP-mEYFP基于重组底物的蛋白酶测定法（适用于96孔板形式），在代表野生型和塞姆利基森林病毒nsP 1/nsP 2切割位点的P5、P4、P2、P1、P1′和P2′变体的底物上研究了VEEV nsP 2蛋白酶的氨基酸偏好性。还通过分析与寡肽底物复合的VEEV nsP 2的建模结构，在计算机上研究了酶特异性的结构基础。据我们所知，VEEV nsP 2蛋白酶P1′氨基酸偏好性的体外筛选至今尚未确定，因此，我们的结果可能为不同甲病毒或其他IV组病毒的研究和抑制剂设计提供有价值的信息。
The non-structural protein 2 (nsP2) of alphavirus Venezuelan equine encephalitis virus (VEEV) is a cysteine protease that is responsible for processing of the viral non-structural polyprotein and is an important drug target owing to the clinical relevance of VEEV. In this study we designed two recombinant VEEV nsP2 constructs to study the effects of an N-terminal extension on the protease activity and to investigate the specificity of the elongated enzyme in vitro. The N-terminal extension was found to have no substantial effect on the protease activity. The amino acid preferences of the VEEV nsP2 protease were investigated on substrates representing wild-type and P5, P4, P2, P1, P1′, and P2′ variants of Semliki forest virus nsP1/nsP2 cleavage site, using a His6-MBP-mEYFP recombinant substrate-based protease assay which has been adapted for a 96-well plate-based format. The structural basis of enzyme specificity was also investigated in silico by analyzing a modeled structure of VEEV nsP2 complexed with oligopeptide substrate. To our knowledge, in vitro screening of P1′ amino acid preferences of VEEV nsP2 protease remains undetermined to date, thus, our results may provide valuable information for studies and inhibitor design of different alphaviruses or other Group IV viruses.
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影响因子：
3.5
作者：
Fox, JD;Routzahn, KM;Waugh, DS
通讯作者：
Waugh, DS
影响因子：
5.6
作者：
Golda, Maria;Motyan, Janos Andras;Tozser, Jozsef
通讯作者：
Tozser, Jozsef
影响因子：
5.4
作者：
RIKKONEN, M;PERANEN, J;KAARIAINEN, L
通讯作者：
KAARIAINEN, L
DOI：
10.1046/j.1432-1327.1999.00687.x
发表时间：
1999-09-01
期刊：
EUROPEAN JOURNAL OF BIOCHEMISTRY
影响因子：
--
作者：
Boross, P;Bagossi, P;Tözsér, J
通讯作者：
Tözsér, J
影响因子：
4.4
作者：
JORGENSEN, WL;CHANDRASEKHAR, J;KLEIN, ML
通讯作者：
KLEIN, ML