Plasmid-based target protectors allow specific blockade of miRNA silencing activity in mammalian developmental systems.
Plasmid-based target protectors allow specific blockade of miRNA silencing activity in mammalian developmental systems.
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DOI：
10.3389/fncel.2013.00163
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发表时间：
2013
影响因子：
5.3
通讯作者：
Sun T
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Knauss JL;Bian S;Sun T
在过去的十年中，微小RNA（miRNAs）已成为基因表达的重要转录后调节因子。尽管关于miRNA的基因组学、生物发生、作用机制和功能已经有了大量的发现，但将miRNA表达改变的表型归因于特定靶点的挑战仍然存在。在此，我们将现有的在其靶点的3′非翻译区（3′UTR）的单个结合位点阻断miRNA作用的靶点保护剂概念应用于一种基于质粒的方法。我们在体外优化并证明了靶点保护剂的功效，它能阻断对荧光素酶构建体和一种内源性蛋白质的抑制。以发育中的小鼠大脑皮层为模型，我们验证了靶点保护剂在体内是有效的，其中Pten 3′UTR中miR - 19a结合位点的保护剂改变了神经祖细胞的增殖和分化，重现了Pten异位表达的表型。我们的研究引入了一种新的工具，用于分析哺乳动物发育系统中特定的miRNA与靶点的相互作用，促进进一步的miRNA功能发现。
Over the past decade, microRNAs (miRNAs) have emerged as essential posttranscriptional regulators of gene expression. Though a great deal has been discovered about miRNA genomics, biogenesis, mechanisms, and functions, the challenge of attributing phenotypes of altered miRNA expression to specific targets still remains. Here, we apply the existing target protector concept of blocking miRNA action at a single binding site in the 3′untranslated region (3′UTR) of its target to a plasmid-based approach. We optimize and demonstrate target protector efficacy in vitro, where it blocks repression of a luciferase construct and an endogenous protein. Using the developing mouse cortex as a model, we validate that target protectors are effective in vivo, where protectors for the miR-19a binding sites in the Pten 3′UTR alter proliferation and specification of neural progenitors, phenocopying Pten ectopic expression phenotypes. Our study introduces a new tool for analyzing specific miRNA:target interactions across mammalian developmental systems, facilitating further miRNA functional discoveries.
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影响因子：
8.8
作者：
Bian S;Hong J;Li Q;Schebelle L;Pollock A;Knauss JL;Garg V;Sun T
通讯作者：
Sun T
影响因子：
64.8
作者：
Zheng, Hongwu;Ying, Haoqiang;Yan, Haiyan;Kimmelman, Alec C.;Hiller, David J.;Chen, An-Jou;Perry, Samuel R.;Tonon, Giovanni;Chu, Gerald C.;Ding, Zhihu;Stommel, Jayne M.;Dunn, Katherine L.;Wiedemeyer, Ruprecht;You, Mingjian J.;Brennan, Cameron;Wang, Y. Alan;Ligon, Keith L.;Wong, Wing H.;Chin, Lynda;DePinho, Ronald A.
通讯作者：
DePinho, Ronald A.
DOI：
10.1073/pnas.0914785107
发表时间：
2010-08-31
影响因子：
11.1
作者：
Conte, Ivan;Carrella, Sabrina;Banfi, Sandro
通讯作者：
Banfi, Sandro
影响因子：
10.5
作者：
Mu, Ping;Han, Yoon-Chi;Ventura, Andrea
通讯作者：
Ventura, Andrea
影响因子：
64.5
作者：
Lewis, BP;Shih, IH;Burge, CB
通讯作者：
Burge, CB