Infectious Bursal disease virus: ribonucleoprotein complexes of a double-stranded RNA virus.
Infectious Bursal disease virus: ribonucleoprotein complexes of a double-stranded RNA virus.
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DOI：
10.1016/j.jmb.2008.11.029
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发表时间：
2009-02-27
影响因子：
5.6
通讯作者：
Castón JR
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Luque D;Saugar I;Rejas MT;Carrascosa JL;Rodríguez JF;Castón JR
具有支架和/或调节功能的基因组结合蛋白在生物体中普遍存在，包括真核细胞中的组蛋白、一些双链DNA病毒中的组蛋白样蛋白以及单链RNA病毒的核衣壳蛋白。然而，dsRNA病毒缺乏这些核糖核蛋白(RNP)复合体，其特征是共享一个参与dsRNA基因组代谢和隔离的二十面体核心。小鸟病毒具有两部分dsRNA基因组，构成了一个公认的例外，只有一个单壳的T=1113衣壳。此外，与许多阴性单链RNA病毒一样，基因组dsRNA与核衣壳蛋白(VP3)和依赖于RNA的RNA聚合酶(VPG)结合。我们使用电子显微镜和功能分析来表征传染性法氏囊病病毒的这些RNP复合体，该病毒是鸟导航病毒科中特征最好的成员。对病毒颗粒的轻微破坏表明，VP3是最丰富的核心蛋白，存在于∼中，每个病毒粒子有450个拷贝，在与dsRNA密切相关的丝状物质中被发现。我们开发了一种纯化RNP和VPG-dsRNA复合体的方法。对这些复合体的分析表明，它们是含有恒定蛋白质量的线性分子。对核酸酶的敏感性分析表明，VP3在没有引入基因组紧凑的情况下，使基因组dsRNA更难被RNaseIII所访问。此外，我们还发现，与大多数dsRNA病毒不同，这些RNP复合体具有不依赖衣壳的方式合成RNA的功能。
Genome-binding proteins with scaffolding and/or regulatory functions are common in living organisms and include histones in eukaryotic cells, histone-like proteins in some double-stranded DNA (dsDNA) viruses, and the nucleocapsid proteins of single-stranded RNA viruses. dsRNA viruses nevertheless lack these ribonucleoprotein (RNP) complexes and are characterized by sharing an icosahedral T = 2 core involved in the metabolism and insulation of the dsRNA genome. The birnaviruses, with a bipartite dsRNA genome, constitute a well-established exception and have a single-shelled T = 13 capsid only. Moreover, as in many negative single-stranded RNA viruses, the genomic dsRNA is bound to a nucleocapsid protein (VP3) and the RNA-dependent RNA polymerase (VPg). We used electron microscopy and functional analysis to characterize these RNP complexes of infectious bursal disease virus, the best characterized member of the Birnaviridae family. Mild disruption of viral particles revealed that VP3, the most abundant core protein, present at ∼ 450 copies per virion, is found in filamentous material tightly associated with the dsRNA. We developed a method to purify RNP and VPg–dsRNA complexes. Analysis of these complexes showed that they are linear molecules containing a constant amount of protein. Sensitivity assays to nucleases indicated that VP3 renders the genomic dsRNA less accessible for RNase III without introducing genome compaction. Additionally, we found that these RNP complexes are functionally competent for RNA synthesis in a capsid-independent manner, in contrast to most dsRNA viruses.
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